[发明专利]一种用于嗜肺巴斯德杆菌的冻干保护剂、冻干粉及其制备方法

说明书

本发明属于菌种保护剂的技术领域，具体涉及一种用于嗜肺巴斯德杆菌的冻干保护剂、冻干粉及其制备方法。所述冻干保护剂的组成包括胎牛血清、蔗糖、羧甲基纤维钠、脱脂奶粉以及甘油；所述嗜肺巴斯德杆菌为ATCC标准菌株中的ATCC35149嗜肺巴斯德杆菌；用于嗜肺巴斯德杆菌冻干保护剂具有体积小、含菌量高、稳定性高、保存时间长、便于保藏、运输，使用方便等优点，所述嗜肺巴斯德杆菌冻干保护剂能改善目前嗜肺巴斯德杆菌能力验证样品活菌率不高、不稳定等难题，促进嗜肺巴斯德杆菌能力验证计划开展，具有重要的意义和应用价值。

技术领域

本发明属于菌种保护剂的技术领域，具体涉及一种用于嗜肺巴斯德杆菌的冻干保护剂、冻干粉及其制备方法。

背景技术

嗜肺巴斯德杆菌(Pasteurella pneumotropica)属于巴斯德菌科巴斯德菌属，为革兰阴性短杆或球杆菌，是一种条件致病菌，会导致免疫缺陷小鼠严重及致命的感染，在动物免疫机制受到抑制和应激因子的作用下，容易发生呼吸道疾病，还可与仙台病毒、肺支原体等呼吸道病原微生物合并感染影响实验动物质量及对实验结果产生严重干扰，也是人类污染的潜在来源。该疾病的临床表现包括皮下脓肿、呼吸道定植和全身感染。国家标准GB14922.2-2011《实验动物微生物等级及监测》将其列为无特定病原体级大小鼠、豚鼠、兔等实验动物必须排除的特定病原体之一。

目前在病原检测能力验证计划中，多选择此类发病率高，对动物危害大的病原进行能力验证评价，以便评价质量检测实验室对病原检测的能力。

但嗜肺巴斯德杆菌对温度敏感，低温或常温不易保存，很容易失活，给能力验证样品制备和运输带来极大不便，制约了嗜肺巴斯德杆菌能力验证样品制备及嗜肺巴斯德杆菌检测能力验证计划的开展，因此，本发明提供了一种冻干保护剂，用于改善目前嗜肺巴斯德杆菌能力验证样品活菌率不高、不稳定等难题。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种用于嗜肺巴斯德杆菌的冻干保护剂、冻干粉及其制备方法，所述冻干保护剂，能改善目前嗜肺巴斯德杆菌能力验证样品活菌率不高、不稳定等难题，促进嗜肺巴斯德杆菌能力验证计划开展，具有重要的意义和应用价值。

本发明的技术内容如下：

本发明提供了一种用于嗜肺巴斯德杆菌的冻干保护剂，所述冻干保护剂的组成包括胎牛血清、蔗糖、羧甲基纤维钠、脱脂奶粉以及甘油；

所述嗜肺巴斯德杆菌为ATCC标准菌株中的ATCC35149嗜肺巴斯德杆菌；

按质量分数计，所述胎牛血清占5～10％、蔗糖占5～8％、羧甲基纤维钠占0～1％、脱脂奶粉占0～20％、甘油占0～1％，生理盐水补足至100％；

所述羧甲基纤维钠、脱脂奶粉以及甘油的用量均不为0；

优选地，所述冻干保护剂中，所述胎牛血清占10％、蔗糖占8％、羧甲基纤维钠占1％、脱脂奶粉占20％、甘油占1％；

所述胎牛血清为Gibco低内毒素水平胎牛血清FBS；

所述脱脂奶粉为BD Difco TM skim Milk脱脂奶粉，其具有极佳溶解性、酪蛋白含量适中、脱脂效果彻底的特点；

所述冻干保护剂的悬浮基质为生理盐水。

本发明还提供了一种嗜肺巴斯德杆菌冻干粉，其为将嗜肺巴斯德杆菌菌液与上述冻干保护剂混合，进行冻干得到。

本发明还提供了一种嗜肺巴斯德杆菌冻干粉的制备方法，包括如下步骤：

1)制备冻干保护剂：将胎牛血清、蔗糖、羧甲基纤维钠、脱脂奶粉、甘油以及生理盐水按照配方混合，搅拌均匀，即为冻干保护剂；

2)将嗜肺巴斯德杆菌与之混合分装至冻存管中，-80℃预冷1h后放置于真空冷冻干燥机，-60℃真空冻干15h，即为嗜肺巴斯德杆菌冻干粉。