[发明专利]一种光敏染色上样凝胶体系及其制备方法

说明书

本发明公开了一种光敏染色上样凝胶体系及其制备方法，本发明提供了一种光敏染色上样凝胶体系、使用其分离检测低密度脂蛋白亚类的凝胶体系的制备方法以及使用其分离检测高密度脂蛋白亚类的凝胶体系的制备方法。本发明得到的上样凝胶通过添加光敏催化剂、脂类染色剂、缓冲溶液并调节其浓度使其具有上样、染色、成胶30分钟一次完成，并配合相应的凝胶体系用于低密度脂蛋白亚类和高密度脂蛋白亚类的分离检测，使其具有简单实用、重复性好，与进口的LipoprintLDLsubfractionskit以及LipoprintHDLsubfractionskit相比具有同样效果，而且价格低廉，易于推广使用。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体是指一种光敏染色上样凝胶体系及其制备方法。

背景技术

心血管疾病在我国逐年增加的趋势未见降低。常规血脂检测包括总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)仍然在各大医院中广泛使用，但有其局限性：大约50％的心血管疾病患者脂类水平显示正常，仅有30％的心脏病患者常规血脂检测异常，而许多低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇正常的病人显示出亚类检测的异常，因此，低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇亚类的检测可以更早、更全面的评估心血管疾病的风险。对于早期干预、进一步筛查影响心血管疾病发生的危险因素具有重要意义，如探讨饮食、肠道菌群、生活方式、运动等因素对于脂蛋白亚类的影响，以及检测心血管疾病早期的脂类改变都需要一种准确、客观的脂蛋白亚类检测的方法，来评价患者的心血管疾病风险。

脂蛋白的分离使用过密度梯度离心法、凝胶梯度电泳法以及核磁共振检测法，这些方法或需要昂贵的设备，或凝胶制备复杂，未能在临床上广泛使用，而聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法用于脂蛋白亚类的分离首先在国外出现，并被美国FDA批准用于临床检测，但该试剂盒的价格昂贵，并受国外贸易制裁的影响，在国内难以普及。

因此，在综合现有技术的基础上，研发出一种廉价的、可与国外检测效果相当的脂蛋白亚类检测试剂盒具有重要的意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是一种光敏染色上样凝胶体系及其制备方法。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为一种光敏染色上样凝胶体系，是由以下重量份原料制成：包括蔗糖13-20wt％，丙烯酰胺2.5-3.0wt％，双丙烯酰胺0.15-0.3wt％，核黄素磷酸钠0.5-1wt％，苏丹黑B0.006-0.008g％，丙二醇1-2wt％，二甲基甲酰胺为0.5-1wt％，Tris-盐酸缓冲液。

作为改进，是由以下重量份原料制成：包括蔗糖15-17wt％，丙烯酰胺2.7-3.0wt％，双丙烯酰胺0.2-0.3wt％，核黄素磷酸钠0.7-0.8wt％，苏丹黑B0.006-0.008g％，丙二醇1.5-2wt％，二甲基甲酰胺为0.5-0.7wt％，Tris-盐酸缓冲液。

作为改进，所述Tris-盐酸缓冲液的PH值小于8。

一种光敏染色上样凝胶体系的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：配制0.045M的Tris-盐酸缓冲液，并调节PH值作为缓冲液备用；

步骤2：使用缓冲液配制含有丙烯酰胺、双丙烯酰胺的储存液，稀释至适宜浓度，并加入四甲基乙二胺、过硫酸铵进行混合；

步骤3：将洁净的石英管用封口膜封底，每管灌注步骤2配制的液体后垂直静止20-40分钟形成第三段胶；

步骤4：再次使用缓冲液配制含有丙烯酰胺、双丙烯酰胺的储存液，稀释至适宜浓度，并加入四甲基乙二胺、过硫酸铵进行混合，并将第三段胶上的液体吸除干净后灌注于第三段胶上形成第二段胶；

步骤5：将灌注完凝固后的胶管保存在缓冲液中；