[发明专利]一种基于聚乙二醇型离子液体分离纯化粗多糖的方法

说明书

本发明具体公开了一种基于聚乙二醇型离子液体分离纯化粗多糖的方法，属于活性物质分离纯化技术领域，所述的聚乙二醇型离子液体为[PEG₃mim][PF₆]，[PEG₃mim][PF₆]可用于选择性沉淀多糖类化合物。其特征主要包括以下步骤：以葡聚糖为模型化合物，考察离子液体阳离子侧链链长对多糖回收率的影响；沸水提取中草药多糖，离心，醇沉，冷冻干燥，获得粗多糖；[PEG₃mim][PF₆]组成的离子液体体系对多糖进行沉淀，获得精制多糖；精制多糖的单糖组成分析。本发明的离子液体适合于快速大量生产活性多糖，具有绿色、环保和高效等优点，普遍适用于粗多糖的纯化和精制。

技术领域

本发明属于生物活性物质分离纯化技术领域，具体涉及一种基于聚乙二醇型离子液体分离纯化粗多糖的方法，特指离子液体[PEG₃mim][PF₆]用于植物粗多糖的快速分离。

背景技术

碳水化合物是自然界分布最广的一类有机化合物。在生物体中，碳水化合物主要用作能量来源、结构物质和功能性物质，其在多种生物代谢过程发挥着重要作用。研究其结构和功能的相关性，通常需获得高纯度的多糖样品。

水提醇得到的粗多糖，含有蛋白质、色素等极性杂质，这些杂质给多糖的进一步分离、纯化、结构鉴定及活性评价带来困难，需要去除。常用的多糖去蛋白方法有Sevage法，这种方法使用氯仿和正丁醇等有毒试剂，需进行多次去除，操作复杂，样品损失大。柱色谱分离技术费时费力，用以大规模生产仍有挑战。

绿色溶剂离子液是由有机阳离子和无机或有机阴离子构成，熔点小于100℃的有机盐。离子液具有溶解性优良、可设计性强、蒸气压低和热稳定性好等优点，因此已被用于天然产物等领域。自2002年Swatloski等人首次报道离子液[C4mim][Cl]可作为溶剂溶解纤维素以来，离子液对木质纤维素和几丁质等难溶性碳水化合物的溶解和分离受到了极大的关注。通过设计和合成功能性离子液，可实现对木质纤维素三组分，即纤维素，半纤维素和木质素的高效分离。

近年来，离子液体广泛地应用于抗生素、生物碱、药物、小分子有机化合物分离和纯化，且在分离过程中能保持原有生物物质的活性。但到目前为止，多数研究将离子液作为良溶剂，更多关注其选择溶解性，而对其选择性沉淀和分离能力研究很少。由此可知，进一步开发基于离子液体的多糖分离纯化方法具有重要的应用价值和潜力。

发明内容

本发明的目的在于开发一种基于聚乙二醇型离子液体分离纯化粗多糖的方法，以实现绿色、高效、快速选择性纯化水溶性多糖。

本发明提供一种基于聚乙二醇型离子液体分离纯化粗多糖的方法，所述分离纯化粗多糖的方法包括如下步骤：

(1)离子液体体系优化：以D100K为模型化合物，探讨离子液体系中各组分含量、温度及阳离子侧链链长对D100K回收率的影响；

(2)粗多糖制备：沸水提取中草药粗多糖，离心取上清液，加入无水乙醇，低温过夜沉淀，离心取沉淀，干燥获得粗多糖；

(3)离子液体选择性沉淀多糖：配制一定已知浓度粗多糖水溶液，向所述多糖水溶液中加入已知量的离子液，涡旋混匀，而后向该体系继续加入抗溶剂，再次涡旋混匀；1500rpm离心3min，收集沉淀，用甲醇洗涤三次，后再次收集沉淀，干燥；

(4)超滤脱盐：上相糖溶液超滤得到去盐多糖溶液，冷冻干燥，获得脱色脱蛋白的高纯度精制多糖；

所述的聚乙二醇型离子液体为[PEG₃mim][PF₆]，结构通式如式(1)所示：

优选的，所述的[PEG₃mim][PF₆]常温为液体。