[发明专利]一种组织库标本冷冻保存液及其应用

说明书

本发明涉及一种组织库标本冷冻保存液及其应用，属于生物医学技术领域。本发明通过不同盐溶液的混合，模拟人体正常细胞微环境，模拟细胞外液，保持正常细胞渗透压，避免组织细胞水肿或脱水，给予生物大分子最基本的生存空间；本发明通过加入硫氰酸胍、硫氰酸铵，降低RNAse(RNA水解酶)活性，改善RNA链生存状态，保护相较于蛋白质、DNA而言更易降解的RNA；本发明通过加入甘油成分，维持组织表面张力，保持标本光泽度，防止腐败，提高折光率，保证保存液的流动性。

技术领域

本发明涉及一种组织库标本冷冻保存液及其应用，属于生物医学技术领域。

背景技术

在医院、医学院、科研单位等为了医治、教学和科研任务，常建立有人体组织库，包括器官及多种人体组织细胞库。组织库以样本为中心，将患者信息、随访数据等宏观数据与DNA、RNA及蛋白质等微观数据进行信息化整合，为未来科学研究提供高水平的样本支撑。目前近80％医院的生物样本由相对应的科室及病理科保存与应用，以-80℃超低温冰箱、-196℃液氮罐为主要保存容器，较多以自来水为标本的保存液，参与标本采集、运输、储存、实验的过程。冷冻标本DNA和RNA通常具有高分子量且没有交联，适用于全基因组扩增、全基因组测序和cDNA微阵列分析等多种用途，也可以保持完整的酶活性，便于蛋白质组学分析。

保存完好的冷冻生物样本是评估基因组、转录组和蛋白质组的理想选择。但在实际操作中，由于人体组织自临床采集至前期处理完毕存在时间差，会造成一定程度的组织缺血和降解；继发于血液和氧气供应损失，基因表达和蛋白质磷酸化模式也会受到人为的影响；且标本经历多次超低温-常温处理反复冻融的循环，不可避免地导致会对要分析的大分子和细胞造成损伤。标本存在自融细胞，RNA完整性被破坏，干扰下游功能性免疫学分析，为信息库的数据搭建造成一定程度的阻碍和不便。目前现有机构的组织库大多通过标本的前期处理及冷冻、冷藏等手段来保持标本的新鲜程度，防止标本的降解。标本保存通常分为生物保存及低温保存。生物保存是指标本的常规方法包括化学固定(如10％福尔马林，乙醇)或者常温下借助基质进行干燥保存。组织的冷冻保存有两种不同的低温保存方法：(1)冷冻保存(已知的速冻或超速冻)或者程序降温(慢速可程序化)；(2)非结晶状态的类似玻璃状的玻璃化保存。通常具体流程如下：标本置于含有湿冷(2-8℃)的清洁或无菌容器中，以便从手术室转移到病理科或储存库。无法立即固定的标本真空保存，自来水浸泡，根据标本部位与后续处理的需求进行低温或超低温分块储存。在此后需求的基础节点，取出融解，进行下一部科研需求所需的步骤。

组织库以样本为中心，将患者信息、随访数据等宏观数据与DNA、RNA及蛋白质等微观数据进行信息化整合，同时应用数字化手段对样本的病理及影像图像等进行整理，生物样本库搭建信息化及数字化共享平台，为未来科学研究提供高水平的样本支撑。因此，组织库数据的搭建需要力求准确性与严谨性。组织库生物标本数据获取的准确性、完备性基于标本中相关标志物的完整性、可检出性及低降解性，有赖于生物大分子中多种蛋白质、遗传物质DNA、RNA的稳定性，这是数据库建立的关键与核心，也是依据数据库进行分析、监测、健康筛查和诊断的基石。但在实际操作中，反复冻融冷冻状态和反复冷却复温玻璃化状态的样本，将会对要分析的大分子和细胞造成损伤，反复冻融的过程将会导致热力学自由能降低以及蛋白质冰晶相互作用，这样反而加速了生物标本降解；生物标本冷藏运输所使用的冷链价格昂贵，而且容易出故障，需承担一定的风险。这样，会面临生物下游分子及各级标志物数量与活体相较不准确、模拟人体存在较大偏倚，进行科学研究则会造成一定程度的不可信性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种组织库标本冷冻保存液及其应用，本发明的组织库标本冷冻保存液目的在于延长新鲜人体标本采集时间，保持基因组、转录组、蛋白组的完整性，以解决现组织库标本保存所存在的问题。