[发明专利]石龙芮体细胞胚介导的遗传转化方法

权利要求书

1.石龙芮体细胞胚介导的遗传转化方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)将石龙芮种子消毒，播于无菌苗培养基中，进行无菌苗培养；

(2)选择无菌苗的营养器官为外植体，在转化侵染介质中进行农杆菌转化介质侵染；

(3)将侵染后的外植体平铺于共培养培养基中进行共培养；

(4)将共培养后的外植体转入含有抗生素的体细胞胚诱导培养基中进行体细胞胚的诱导发生以及抗性体细胞胚的筛选，其中，体细胞胚诱导培养基包括以下组分：MS盐、B5有机、10.0mg/L NAA、30g/L蔗糖、7.8g/L琼脂粉，体细胞胚诱导培养基的pH为5.8；

(5)将抗性体细胞胚置于生根培养基中，于光照条件下诱导胚体生根，其中，生根培养基包括以下组分：1/2MS盐、1/2B5有机、0.1mg/L NAA、15g/L蔗糖、7.8g/L琼脂粉，生根培养基的pH为5.8；

(6)炼苗、移栽。

2.根据权利要求1所述的石龙芮体细胞胚介导的遗传转化方法，其特征在于，步骤(2)中，所述转化侵染介质包括以下组分：MS盐、B5有机、15g/L葡萄糖，转化侵染介质的pH为5.8。

3.根据权利要求1所述的石龙芮体细胞胚介导的遗传转化方法，其特征在于，步骤(3)中，共培养培养基包括以下组分：MS盐、B5有机、40mg/L乙酰丁香酮、30g/L蔗糖、7.8g/L琼脂粉，共培养培养基的pH为5.8。

4.根据权利要求1所述的石龙芮体细胞胚介导的遗传转化方法，其特征在于，步骤(4)中，体细胞胚诱导培养基含有100mg/L硫酸卡那霉素和500mg/L羧苄青霉素钠。

5.根据权利要求1所述的石龙芮体细胞胚介导的遗传转化方法，其特征在于，步骤(5)中，将抗性体细胞胚置于25℃，16h光照/8h黑暗，光照度为120μmol.m^-2s^-1条件下诱导生根。