[发明专利]一种碱性磷酸酶的检测方法

说明书

本发明提供一种碱性磷酸酶的检测方法，含有碱性磷酸酶的土壤和对氨基苯磷酸水溶液、脂肪醇聚氧乙烯磺酸钠在恒温箱孵育3‑5h，加入硫酸铜溶液混合，取上清液和三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液反应，制得碱性磷酸酶供试品溶液，碱性磷酸酶供试品溶液采用紫外分光光度计在500‑550nm检测，经过实验结果表明准确率高达99％，检出限为0.01mg/g。

技术领域

本发明涉及检测碱性磷酸酶领域，特别涉及一种碱性磷酸酶的检测方法。

背景技术

土壤作为“类生命体”，其几乎所有的生物化学反应都是由酶驱动的。土壤酶活性可作为“土壤肥力”、“土壤质量”及“土壤健康”等土壤生物活性和生产力的重要指标。土壤酶促进了土壤腐殖质的形成，进入土壤的有机物质和有机残体转化成土壤腐殖质是一个很复杂的生化过程，这一过程离不开各种酶的催化。

本发明涉及土壤中的碱性磷酸酶的检测方法，截至目前，通过色谱法，比色法，化学发光法，电化学法，荧光法，表面增强共振拉曼散射等不同的分析技术已经发展了多种碱性磷酸酶活性的检测方法。其中，荧光检测技术由于其简单灵敏、实时性等优点而受到了高度关注。由于检测土壤中碱性磷酸酶含量，容易由于土壤颜色、土壤中所含的其他元素和土壤酶影响，导致检测结果不准确，因此，本发明提出一种去除背景干扰、准确度高的碱性磷酸酶的检测方法。

发明内容

鉴以此，本发明提出一种碱性磷酸酶的检测方法，解决上述问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种碱性磷酸酶的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)溶液配制：取试样土壤加入对氨基苯磷酸水溶液中，振荡50-70s，加入脂肪醇聚氧乙烯磺酸钠，混合，静置8-10min，放入36-38℃恒温培育箱中培育3-5h，加入硫酸铜溶液，离心，取上清液；上清液中加入三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液，摇晃1-3min，制得碱性磷酸酶供试品溶液；

(2)样品检测：取步骤(1)制得碱性磷酸酶供试品溶液使用紫外可见分光光度计检测。

进一步的，步骤(1)中，所述试样土壤、对氨基苯磷酸水溶液和脂肪醇聚氧乙烯磺酸钠质量比为1:5-7:0.5-0.8。

进一步的，步骤(1)中，所述对氨基苯磷酸水溶液浓度为8-10mmol/L。

进一步的，步骤(1)中，所述硫酸铜溶液浓度为7-10mmol/L。

进一步的，步骤(1)中，所述硫酸铜溶液和土壤试样的质量比为2-3:1。

进一步的，步骤(1)中，所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液浓度为200-250mmol/L，调节pH值至7.5-8.5。

进一步的，步骤(1)中，所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液和上清液体积比为1-3:1。

进一步的，步骤(2)中，所述紫外可见分光光度计检测波长为500-550nm。

进一步的，所述紫外可见分光光度计检测波长为530nm。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明的碱性磷酸酶的检测方法能够准确检出土壤中碱性磷酸酶的含量，具有灵敏度、准确性高，抗干扰能力强等优点。通过对氨基苯磷酸水溶液和脂肪醇聚氧乙烯磺酸钠作为底物，能够提高碱性磷酸酶酶解活性成分含量，将活性成分结合于供试品溶液体系中，孵化后的活性成分和硫酸铜溶液、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液反应，可以提高碱性磷酸酶中活性成分信号，通过验证本发明的碱性磷酸酶试验方法具有高达99％的准确率，检出限为0.01mg/g。

具体实施方式

为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。