[发明专利]一种脐带血提取免疫细胞的培养方法

权利要求书

1.一种脐带血提取免疫细胞的培养方法，其特征在于：包括如下步骤

S1、将脐带血单个核细胞用第一培养基培养至细胞生长状态稳定，后续改用第二培养基进行培养，第二培养基中添加胎牛血清、诱导培养组合物、抗生素、间充质干细胞生长添加物、IL-1a和抗CD3单克隆抗体得到最终的培养液；

S2、第一培养基对单个核细胞进行原代培养及传代培养至第2-3代，后续传代培养改用第二培养基；最终得到免疫细胞；

S3、将制得的培养液导入培养袋中，然后将S2中得到的免疫细胞装入进行最后一步的培养；

S4、对最终培养的免疫细胞进行收集，然后进行冷存。

2.根据权利要求1所述的一种脐带血提取免疫细胞的培养方法，其特征在于：所述S2中的单个核细胞接种于培养瓶中后放于34℃，饱和湿度，3％CO培养箱中培养2-5天。

3.根据权利要求2所述的一种脐带血提取免疫细胞的培养方法，其特征在于：所述培养瓶中的培养液，单个核细胞接种于细胞培养瓶后，2-3天后半量换液，一周时间后首次全量换液。

4.根据权利要求1所述的一种脐带血提取免疫细胞的培养方法，其特征在于：所述S1中的抗CD3单克隆抗体的细胞密度3×96-1×118个/ml。

5.根据权利要求1所述的一种脐带血提取免疫细胞的培养方法，其特征在于：所述S1中IL-1a是在所述脐带血核细胞加入所述胎牛血清和抗生素后15min内加入，且加入时的温度控制在10-20℃为最佳。

6.根据权利要求1所述的一种脐带血提取免疫细胞的培养方法，其特征在于：所述S1中的诱导培养组合物包括纤维连接蛋白、IL-2、IL-1a、抗CD3单克隆抗体，优选地，还含有IL-15。

7.根据权利要求1所述的一种脐带血提取免疫细胞的培养方法，其特征在于：所述S2中的培养袋体积大于培养液总体积。