[发明专利]一种生物降解及转化有机污染物的方法

说明书

本发明公开了一种生物降解及转化有机污染物的方法，包括以下步骤：将白腐真菌Phanerochaete sordida YK‑624接种至固体培养基进行传代培养；再接种至液体培养基继续培养；向液体培养基中加入4,4’‑二羟基二苯甲酮进行生物制备，静置培养；菌体与培养液分离，培养液浓缩处理后，加入有机溶剂萃取；对萃取液进行浓缩，梯度洗脱，产物跟踪；再次进一步分离纯化，即得到4‑羟苯甲酸‑4‑羟基苯酯。本发明使用白腐真菌在降解有机污染物4,4’‑二羟基二苯甲酮的同时，生成了代谢产物4‑羟苯甲酸‑4‑羟基苯酯，这不仅可以应用于有机物污染物的生物去除，还能够用于4‑羟苯甲酸‑4‑羟基苯酯的生物制备领域。

技术领域

本发明涉及微生物降解领域，具体涉及一种生物降解及转化有机污染物的方法。

背景技术

4,4’-二羟基二苯甲酮(4,4’-dihydroxybenzophenone)是一种重要的工业添加剂，多被用于生产具备防晒作用的产品(例如化妆品，个人护理产品，产品外包装等)，因其稳定的化学结构，很难在环境中自然降解，不断蓄积，对生态和生物体健康存在潜在危害。常用的处理有机污染物的方法是物理化学方法，但是处理过程中易对环境造成二次污染。白腐真菌因其强降解能力和降解广谱性，被广泛应用于有机污染物的生物降解研究，但是目前却并没有关于针对4,4’-二羟基二苯甲酮的降解及其代谢产物的制备方案。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种生物降解及转化有机污染物的方法。

本发明的目的采用以下技术方案来实现：

一种生物降解及转化有机污染物的方法，包括以下步骤：

步骤1，将白腐真菌Phanerochaete sordida YK-624接种至固体培养基进行传代培养；

步骤2，将传代培养后的白腐真菌Phanerochaete sordida YK-624接种至液体培养基继续培养；

步骤3，向液体培养基中加入4,4’-二羟基二苯甲酮进行生物制备，静置培养；

步骤4，将生物制备后的菌体与培养液分离，将分离后的培养液浓缩至原液体培养基体积1/10左右，加入等体积的有机溶剂进行萃取，得到有机相萃取液；

步骤5，对有机相萃取液进行浓缩至干，并用进行梯度洗脱，应用进行产物跟踪；

步骤6，将步骤(5)得到的产物再次进一步分离纯化，即得到高纯度的4-羟苯甲酸-4-羟基苯酯。

优选地，所述步骤1中，固体培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)，马铃薯葡萄糖琼脂培养基的体积为1L，成分包括：淀粉4g、葡萄糖20g、琼脂15g、加水至1L。

优选地，所述步骤1中，传代培养至菌丝体长满平板，整个过程持续时间为3天。

优选地，所述步骤2中，液体培养基为马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)，马铃薯葡萄糖液体培养基的体积为1L，成分包括：淀粉4g、葡萄糖20g、加水至1L。

优选地，所述步骤2中，在液体培养基继续培养的时间为3天。

优选地，所述步骤3中，4,4’-二羟基二苯甲酮加入至液体培养基后至浓度为0.5mmol/L。

优选地，所述步骤3中，静置培养的温度为30℃，时间为7天。

优选地，所述步骤4中，浓缩处理为旋蒸浓缩，浓缩至体积为400-500mL。

优选地，所述步骤4中，有机溶剂为乙酸乙酯，萃取的次数为2-3次。

优选地，所述步骤5中，浓缩为旋蒸浓缩，梯度洗脱使用的是硅胶柱色谱法，产物跟踪使用的是薄层色谱法。