[发明专利]用于特异性检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器以及制备方法和应用

说明书

本发明属于电化学发光检测领域，涉及一种用于特异性检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器以及制备方法和应用，是由恩诺沙星适配体负载于NaYF₄‑PEI‑PTCA纳米复合材料修饰的玻碳电极表面而成，NaYF₄‑PEI‑PTCA纳米复合材料为上转化纳米粒子和苝四羧酸之间以酰胺键结合的产物；恩诺沙星适配体核苷酸序列为apt:5'‑CCC ATC AGG GGG CTA GGC TAA CAC GGT TCG GCT CTC TGA GCC CGG GTT ATT TCA GGG GGA‑3'。本发明传感器可实现对恩诺沙星的灵敏检测，最低检测限为3.0×10^‑15mol/L。

技术领域

本发明属于电化学发光检测领域，涉及用于特异性检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器以及制备方法和应用。尤其涉及将适配体分子负载于基于上转换纳米粒子的苝类衍生物(NaYF₄-PEI-PTCA)修饰的玻碳电极表面，即以apt/NaYF₄-PEI-PTCA/GCE电极为传感元件，定量检测河水中恩诺沙星的电化学发光分析方法。

背景技术

恩诺沙星(Enrofloxacin，ENR)，是第二代氟喹诺酮类抗生素。因其抗菌谱广、杀菌性强、不良反应少、与其他抗生素间无交叉耐药性等特点，进而被广泛应用于动物和水产养殖业等领域。但是长期滥用导致恩诺沙星在动物体内富集，并随动物排泄物进入环境，造成环境污染。此外，在水产养殖业中，有大量恩诺沙星残留在水体中，排放过程也使得水环境受到严重污染。一旦环境受到污染，将会产生过敏反应和肠道菌群失衡等严重影响人类健康的因素。目前，多个国家和地区已经规定ENR在动物源食品中的最大残留量，如欧盟规定ENR的最大残留量为0.3μg/g，我国规定所有食品动物的肌肉、脂肪中最高残留限量为100μg/kg。基于此，建立一种高效、灵敏的恩诺沙星残留检测方法具有重要意义。

目前，已有报道的检测恩诺沙星的方法包括高效液相色谱法、液相色谱-质谱法、酶联免疫法及光电法等。但这些分析方法在实际应用过程中存在很多局限性，例如，高效液相色谱法虽然具有较高的准确度，但仪器昂贵且灵敏度低；液相色谱-质谱法虽然能够用于定性、定量检测，但是仪器操作专业度高，不适合大批量样品的处理以及现场的快速检测；酶联免疫法仅适用于对大量样品的快速筛选，不宜作为单一检测方法；光电法虽然可以达到较高的灵敏度，但是该法的弊端在于受光源的影响较大，稳定性差。因此，开发一种简单快速、选择性好、无需引入外部电源的电化学发光特异性检测恩诺沙星的方法是必要且极其重要的。

电化学发光(ECL)也称为电致化学发光，是电化学方法与化学发光方法的结合与延伸，同时具有电化学方法的灵敏度高、线性范围宽、观察方便和仪器简单和化学发光方法的重现性好、试剂稳定、控制容易等优点。并且，无需引入外部光源，在光电倍增管等光学仪器的辅助下采集发光强度图谱，并建立其与待测物关系从而实现微量分析的一种方法。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中对恩诺沙星检测的不足，提供一种用于特异性检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器以及制备方法和应用。本发明是基于上转化纳米粒子(NaYF₄-PEI)和苝四羧酸(PTCA)之间的酰胺键结合，从而得到NaYF₄-PEI-PTCA纳米复合材料，并将其修饰到玻碳电极表面，使得电化学发光的灵敏度和稳定性显著提高，再通过静电作用负载适配体进而获得电化学发光适配体传感器(简称apt/NaYF₄-PEI-PTCA/GCE传感器)，可特异性识别目标分子恩诺沙星，提高对恩诺沙星的选择性。

为了实现本发明目的，所采用的技术方案为：