[发明专利]一种耦合氮源、pH和温度诱导获得真菌毒素制品的液体发酵方法

说明书

本发明公开了一种耦合氮源、pH和温度诱导获得真菌毒素制品的液体发酵方法，所述方法包括：将产真菌毒素真菌菌种在诱导培养基中培养获得真菌发酵培养液，从所述真菌发酵培养液获得真菌毒素溶液；真菌发酵培养液的发酵条件为，发酵温度为24‑28℃，培养至真菌孢子萌发，再将发酵温度降至16‑22℃继续培养。本发明制备真菌毒素的液体发酵方法，是基于氮源(鸟嘌呤和胍丁胺)诱导协同pH(pH＝4)和温度调控，三者耦合共同促进真菌毒素的代谢生成，真菌毒素的产量高，可重复性强，该液体发酵方法技术成熟度高，便于大规模生产。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种耦合氮源、pH和温度诱导真菌高产真菌毒素，进而获得真菌毒素制品的液体发酵方法。

背景技术

粮食中真菌毒素污染是目前食品安全领域面临的一个突出问题，真菌毒素的检测是污染防控的重点环节之一。真菌毒素标准品的制备对保障量值的准确性、统一性和溯源性具有重要意义。然而由于原料消耗量大，真菌毒素原料的获取是目前限制高质量标准品研制的关键步骤之一。

目前，真菌毒素原料的获得主要有两种途径：一是从自然污染粮食中提取，但需克服污染粮食样品筛查困难(需大规模筛查，样品采集和检测耗时，费用支出高)，并且真菌毒素含量难以保证，存在“高投入，低产出，风险大”的问题；二是将产毒真菌在粮食基质上进行固体发酵培养后获取，固体发酵方法技术成本低，但用于真菌毒素获取时技术自身缺陷明显，特别是大规模发酵培养时热质传递受限，发酵过程参数不易控制，后续真菌毒素萃取需要消耗大量有机溶剂，费时费力，并且利用无污染粮食进行产毒真菌发酵也是一种浪费粮食的行为。

综上所述，现有的真菌毒素原料的获取方法存在着成本高、能耗高、制备难度大的技术问题。如何高效、绿色环保地获取真菌毒素代谢产物，并进行规模化制备，为真菌毒素标准品的研制提供可靠的原料，是亟待解决的技术问题。

发明内容

为此，本发明提供一种耦合氮源、pH和温度诱导真菌高产真菌毒素，进而获得真菌毒素制品的液体发酵方法。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明实施例提供一种耦合氮源、pH和温度诱导获得真菌毒素制品的液体发酵方法，所述方法包括：将产真菌毒素真菌菌种在诱导培养中培养获得真菌发酵培养液，从所述真菌发酵培养液获得真菌毒素溶液；

其中，所述诱导培养基中，各组分的浓度为蔗糖25-35g/L，磷酸二氢钾0.5-1.5g/L，硫酸镁0.2-0.8g/L，硫酸亚铁5-15mg/L，氯化钾0.2-0.8g/L，鸟嘌呤1-1.5g/L，胍丁胺0.1-2g/L；

诱导培养基中，各微量组分的含量为：柠檬酸2-3mg/L，硫酸锰20-30μg/L，硫酸锌2-3mg/L，硼酸20-30μg/L，硫酸铜1-1.5μg/L，钼酸钠20-30μg/L；

所述诱导培养基的pH值为3-5；

真菌发酵培养液的发酵条件为，发酵温度为24-28℃，培养至真菌孢子萌发，再将发酵温度降至16-22℃继续培养。

优选的，所述产真菌毒素真菌菌种先接种于马铃薯培养基，培养一定时间后，取真菌菌丝接种于羟甲基纤维素钠培养基，培养一段时间后，收集培养液过滤、离心，获得真菌孢子；

再将所述真菌孢子制备成真菌孢子悬浮液，再将真菌孢子接种于诱导培养基中进行发酵培养。

优选的，所述产真菌毒素真菌菌种在马铃薯培养基培养时间为3天，培养温度为28℃。

优选的，所述真菌菌丝在羟甲基纤维素钠培养基的培养时间为7天，培养温度为28℃。

优选的，所述真菌孢子发酵培养条件为：发酵温度为26℃，160rpm振荡培养48h至真菌孢子萌发，再将发酵温度降至19℃，继续培养至第10天，获得真菌发酵培养液。