[发明专利]一种基于金黄色葡萄球菌的皮肤炎症体外评价模型的构建方法、评价模型及其应用

权利要求书

1.一种基于金黄色葡萄球菌的皮肤炎症体外评价模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：

于HaCaT细胞中添加浓度为10~25Vol.%的致炎产物，作用HaCaT细胞10~15h，即得到所述评价模型；

所述致炎产物为去除金黄色葡萄球菌后的金黄色葡萄球菌细胞培养液；

所述金黄色葡萄球菌细胞培养液由包括如下步骤的方法得到：

取金黄色葡萄球菌于LB培养基中培养15~20h后，去除金黄色葡萄球菌菌体，留上清液即为金黄色葡萄球菌细胞培养液。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述添加浓度为12.5~25Vol.%。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述添加浓度为12.5Vol.%。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述浓度的筛选方法包括如下步骤：

S1、制备致炎产物，并梯度稀释至不同浓度，备用；

将复苏后的HaCaT细胞经细胞传代培养后，将对数生长期的HaCaT细胞以6000-100000个细胞/孔的密度接种于培养板上并培养；

S2、于所述培养板上培养有所述HaCaT细胞的不同孔内分别添加不同浓度的所述致炎产物后，置于实时无标记细胞分析仪上进行培养；

S3、通过实时无标记细胞分析仪监测细胞生长曲线，选择对HaCaT细胞的细胞增殖造成影响且HaCaT细胞总存活率变化较为稳定的所述致炎产物的添加浓度，即为所述浓度。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤S1中，于培养板上接种HaCaT细胞后的培养时间为20~30h；步骤S2中，于实时无标记细胞分析仪上进行培养的时间为45~52h。

6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤S1中，复苏HaCaT细胞的步骤包括：

将HaCaT细胞悬浮于含有包括8~12Vol.%胎牛血清、0.8~1.3Vol.%青链霉素混合液的DMEM高糖培养基中，培养至细胞占据培养器底面75~85%时即可。

7.一种采用权利要求1-6任一所述构建方法得到的基于金黄色葡萄球菌的皮肤炎症体外评价模型。

8.根据权利要求7所述的评价模型，其特征在于，评价模型中，通过对相关指标的含量分析来进行炎症评价；所述指标选自细胞活性氧、白介素-1、肿瘤坏死因子、人前列腺素E2、环氧合酶和核因子κB中的至少一种。

9.权利要求7-8任一所述评价模型的应用，其特征在于，所述应用包括探究金黄色葡萄球菌在皮肤炎性中的反应机制、筛选抗炎原料和/或组合物和/或药物、筛选具有皮肤屏障修复作用的化妆品原料和/或组合物和/或产品中、化妆品安全性和/或功效评价中的至少一种。