[发明专利]一种适用于紫薇花芽的石蜡切片方法

说明书

本发明专利属于石蜡切片技术领域，是一种适用于紫薇花芽的石蜡切片方法。采用本发明改进后的石蜡切片方法对紫薇花芽进行纵切后，避免了常规方法中容易出现浸蜡不充分、切片空洞、材料碎裂、染色不清晰等现象，获得了组织完整、切片干净、染色清晰的紫薇花芽切片图，从而达到了最佳观察效果。本发明总结出一套简易、高效适用于紫薇花芽石蜡切片的方法，可以对不同发育时期的紫薇花芽进行石蜡切片进而观察紫薇花芽分化的全过程，为后续一系列实验奠定了基础。

技术领域

本发明涉及一种适用于紫薇花芽的石蜡切片方法，属于石蜡切片技术领域。

背景技术

紫薇(Lagerstroemia indica L.)是千屈菜科(Lythraceae)紫薇属(Lagerstroemia)的落叶灌木或小乔木，顶生圆锥花序或集生于新枝条顶端，花型奇特，花期较长，可达100天，又名“百日红”，“满堂红”，是夏季园林应用最广泛的观花植物。花芽分化是成花的重要过程，直接影响开花的质量和数量。因此，研究紫薇的花芽分化过程对其花期调控都具有重要意义。

石蜡切片技术是一种用于观察细胞结构形态以及组织的方法。然而，常规的石蜡切片方法不仅操作过程繁琐，实验周期长；而且切片效果差，成功率较低，无法满足观察紫薇花芽细胞结构形态变化的需求。目前，以紫薇花芽为材料开展石蜡切片技术的研究较少，且切片效果不够理想，鉴于此，浙江农林大学紫薇育种研究团队经过多年的反复试验，总结出一套简易、高效的紫薇花芽石蜡切片方法。

发明专利内容

本发明的目的是提供一种适用于紫薇花芽的石蜡切片方法，在常规方法的“脱水、透明、浸蜡、包埋、切片厚度以及染色方法”上进行了改进，使得紫薇花芽石蜡切片的整个制片程序更易操作，并节省了整个实验时间，缩短了与有毒试剂接触的时间，提高切片成功率，切片效果也较佳。本发明提供的方法可以对不同发育时期的紫薇花芽进行石蜡切片，进而观察紫薇花芽分化的整个过程，为后续的一系列实验奠定了基础。

为此，一种适用于紫薇花芽的石蜡切片方法步骤如下：

1、固定

将修整后的植物材料，为避免褐化立即放入FAA固定液(V_50％无水乙醇∶甲醛∶冰醋酸为8∶1∶1)中，置于4℃冰箱固定24h以上备用。

2、脱水

脱水处理上按照50％乙醇(30min)→70％乙醇(30min)→70％乙醇(过夜)→85％乙醇(50min)→95％乙醇(50min)→100％乙醇(50min)→100％乙醇(50min)的梯度进行；

注：固定后的材料一般不能在无水乙醇中过夜，可放置在70％无水乙醇中过夜，在常规方法中很容易忽视这个问题。

3、透明

采取无水乙醇∶二甲苯＝3∶1→无水乙醇∶二甲苯＝1∶1→无水乙醇∶二甲1∶3→100％二甲苯→100％二甲苯→100％二甲苯(每一级均处理45min)的梯度进行操作；

4、浸蜡

石蜡∶二甲苯＝1∶3(45℃烘箱过夜)→石蜡∶二甲苯＝1∶1(53℃烘箱4h)→石蜡∶二甲苯＝3∶1(53℃烘箱4h)→加纯蜡(60℃烘箱过夜)→早晚每隔12h从烘箱中取出换一次纯蜡(60℃换蜡3d)进行浸蜡处理。

注：浸蜡过程中的石蜡是两种状态的蜡，与二甲苯配比的是液体热蜡(56-58℃)，且为避免将植物材料“烫黑化”，最好沿试管壁缓慢滴加热蜡；纯蜡指的提前准备好的固体碎蜡，换入至试管中即可。

5、包埋

将浸蜡3d后的植物材料开盖2h后进行包埋，此操作的目的是为了将试管内的透明剂(二甲苯)蒸发干净。所有的包埋工具(解剖针、镊子等)以及病理学包埋盒均从烘箱中取出进行包埋操作；