[发明专利]烟草NtTAC1基因在叶片夹角调控中的应用

权利要求书

1.烟草NtTAC1基因，其特征在于，长度为969bp，其编码序列如SEQ ID No.1所示。

2.权利要求1所述烟草NtTAC1基因所编码的烟草NtTAC1蛋白，其特征在于，该蛋白长度为322AA，氨基酸序列如SEQ ID No.2 所示。

3.用于PCR扩增权利要求1所述烟草NtTAC1基因的引物对，其特征在于，引物序列如下：

NtTAC1-F: 5'-ATGAAGATCTTCAATTGGGTGCACC-3'，

NtTAC1-R: 5'-TTAGATCGCATCCATGGGGATTGGG-3'。

4.权利要求1所述烟草NtTAC1基因在叶片夹角调控中应用，其特征在于，该基因在翻译表达后，用于调控烟草叶片夹角。

5.如权利要求4所述烟草NtTAC1基因在叶片夹角调控中应用，其特征在于，应用时，在将NtTAC1基因沉默后，通过降低NtTAC1基因表达量，用于减小烟草叶片夹角。

6.用于敲低权利要求1所述NtTAC1基因表达的重组表达载体，其特征在于，将其命名为：pBWA(V)KS-RNAi-TAC1，该重组表达载体以pBWA(V)KS-RNAi质粒为出发质粒，具体通过如下步骤构建获得：

（一）获得目的序列

设计正反向引物序列如下：

正向引物：

TAC F(+):5’-cagtGGTCTCacaacCTTCAAGATGCATCCATTGCACATA-3’，

TAC F(-):5’-cgatGGTCTCacaggAGAATTGTTTAACTCAATGGCCAGT-3’；

反向引物：

TAC R(+):5’-cagtGGTCTCagggcAGAATTGTTTAACTCAATGGCCAGT-3’，

TAC R(-):5’-cagtGGTCTCatacaCTTCAAGATGCATCCATTGCACATA-3’；

以烟草cDNA为模板进行PCR扩增，获得构建干扰载体的目标序列片段；

具体目的序列如SEQ ID No.3所示；

（二）酶切、连接

将步骤（一）所或目的序列与pBWA(V)KS质粒分包进行BsaI、Eco31I双酶切，并回收酶切产物，随后T4 DNA连接酶将所回收酶切产物进行连接；

（三）转化合筛选

将步骤（二）中连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，并进行筛选、鉴定，最终获得重组正确的用于敲低烟草叶片夹角基因TAC1的重组pBWA(V)KS-RNAi-TAC1表达载体。

7.权利要求6所述用于敲低NtTAC1基因表达的重组表达载体在烟草中应用，其特征在于，将该重组载体转化烟草后，能够降低烟草TAC1基因的表达水平，进而通过降低烟草NtTAC1蛋白表达量来调控烟草叶片夹角。

8.利用权利要求6所述用于敲低NtTAC1基因表达的重组表达载体的转基因烟草新品种培育方法，其特征在于，利用农杆菌介导的基因转化方法，首先将重组表达载体pBWA(V)KS-RNAi-TAC1转化农杆菌并制备浸染液；随后将烟草组培用组培体置于浸染液中进行转染；最后，将侵染后组培体在无菌条件下进行组培、筛选、鉴定，获得NtTAC1基因表达降低的转化正确转基因植物新株系。