[发明专利]抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体及其应用

说明书

本发明属于免疫学技术领域，尤其涉及抗人白介素‑10高亲和力兔单克隆抗体及其应用。本发明中用单个B细胞筛选和培养技术成功开发了高亲和力的抗人白介素‑10兔单克隆抗体A和B，并证明了这两个抗体可以识别人白介素‑10蛋白表面的不同抗原决定簇，可以用于开发双抗夹心法酶联免疫检测试剂盒；利用该抗体对开发的双抗夹心法酶联免疫检测试剂盒，具有特异性高、抗干扰能力强、检测灵敏度高和稳定性好等优点。该方法学的建立，提供了一种能够在血清、细胞培养基样品中稳定检测极微量水平人白介素‑10蛋白的试剂盒。

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，尤其涉及抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体及其应用。

背景技术

人白介素-10蛋白(简称“人白介素-10”，或IL-10)是一种由多种细胞产生的多功能细胞因子，在炎症反应和免疫调节中具有多种作用。IL-10抑制炎症反应和细胞免疫反应，加强与适应性免疫和清除功能相关的耐受性，抑制由单核细胞和巨噬细胞产生的促炎因子。IL-10具有双向调节作用，不仅影响免疫系统，而且可以通过调节生长因子、细胞因子影响许多病理生理过程，包括血管生成、肿瘤形成和感染，慢性炎性肠病、类风湿性关节炎，银屑病、HCV感染、HIV感染等，IL-10都发挥着重要作用。在正常人的血清中，IL-10蛋白水平较低，参考范围为(38.6±10.6)ng/ml。因此开发一种高灵敏度的IL-10蛋白检测方法学，具有非常重要的意义。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体及其应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。

本发明提供了一对结合人人白介素-10蛋白的高亲和力兔单克隆抗体A和B，该抗体能够和重组表达的人人白介素-10结合，也能与细胞分泌的人人白介素-10，也能和人血清中的人白介素-10蛋白结合。抗体A和重组表达人人白介素-10结合的亲和常数为9.62X10^-11M，抗体B和重组表达人人白介素-10结合的亲和常数为9.68X10^-12M。

本发明是这样实现的，抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体，所述兔单克隆抗体为兔单克隆抗体A或兔单克隆抗体B；

所述兔单克隆抗体A的轻链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQID NO:5，SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7；重链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；

所述兔单克隆抗体B的轻链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQID NO:15，SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17；重链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20。

本发明提供的抗体，轻链恒定区为κ链，重链恒定区为IgG1型。

进一步地，所述兔单克隆抗体A轻链可变区序列为SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述兔单克隆抗体B轻链可变区序列为SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。

进一步地，所述兔单克隆抗体A重链可变区序列为SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述兔单克隆抗体B重链可变区序列为SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。

进一步地，所述兔单克隆抗体A轻链序列为SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述兔单克隆抗体B轻链序列为SEQ ID NO:11所示氨基酸。

进一步地，所述兔单克隆抗体A重链氨基酸序列为SEQ ID NO:2；所述兔单克隆抗体B重链序列为SEQ ID NO:12所示氨基酸。