[发明专利]一种肝癌微血管侵犯鉴别模型的构建方法及肝癌微血管侵犯预测值的测试方法

说明书

本发明提供了一种肝癌微血管侵犯鉴别模型的构建方法及肝癌微血管侵犯预测值的测试方法，涉及代谢组学技术领域。本发明提供肝癌微血管侵犯的阳性血清样本和阴性血清样本；测定所述阳性血清样本和阴性血清样本的¹HNMR谱图，以¹HNMR谱图中的全谱数据与胆汁酸特征峰的峰高或积分的比值作为自变量，以肝癌微血管侵犯阳性或阴性作为观察变量，构建正交偏最小二乘判别分析(OPLS‑DA)模型。本发明利用核磁共振氢谱技术结合常规的数据处理软件和数据建模软件即可进行模型的构建，构建方法简单，一次分析即可快速、准确地预测肝癌微血管侵犯阳性或阴性，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及代谢组学技术领域，特别涉及一种肝癌微血管侵犯鉴别模型的构建方法及肝癌微血管侵犯预测值的测试方法。

背景技术

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是全球最常见恶性肿瘤之一。尽管手术切除、局部消融和综合治疗方案不断优化，分子靶向治疗药物也相继问世，但肝癌的病死率仍居高不下。一方面由于肝癌早期症状不明显，确诊时大部分已是晚期，患者几乎丧失了手术根治或移植的可能性；另一方面，患者术后复发率和转移率极高。

微血管侵犯(microvascular invasion，MVI)被认为是肝癌复发的最危险因素之一，预示着肿瘤存在高侵袭性生物学行为。MVI是指在显微镜下于内皮细胞衬覆的脉管腔内见到癌细胞巢团，以门静脉分支为主(含包膜内血管)。病理分级方法：M0：未发现MVI；M1(低危组)：≤5个MVI，且发生于近癌旁肝组织；M2(高危组)：＞5个MVI，或MVI发生于远癌旁肝组织。

目前，MVI的发现仍主要依赖于手术后病理学检查，如果能在术前预测MVI的存在并在早期给予积极干预，势必将改善患者预后。因此，术前预测MVI对提高HCC患者远期生存率及降低术后复发率具有重要意义。目前尚未有快速鉴别MVI的方法的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种肝癌微血管侵犯鉴别模型的构建方法及肝癌微血管侵犯预测值的测试方法。采用本发明构建的模型能够实现肝癌微血管侵犯的快速鉴别。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种肝癌微血管侵犯鉴别模型的构建方法，包括以下步骤：

提供肝癌微血管侵犯的阳性血清样本和阴性血清样本；

测定所述阳性血清样本和阴性血清样本的¹HNMR谱图，以所述¹HNMR谱图中的全谱数据与胆汁酸特征峰的峰高或积分的比值作为自变量，以肝癌微血管侵犯阳性或阴性作为观察变量，采用正交偏最小二乘辨别分析法进行有监督的聚类分析，得到OPLS-DA模型。

优选地，所述测定阳性血清样本和阴性血清样本的¹HNMR谱图的方法包括以下步骤：

(1)分别将所述阳性血清样本和阴性血清样本与甲醇和磷酸盐缓冲液混合，将所得混合液依次进行涡旋振荡、超声和离心，取上清液浓缩至干，得到血清代谢物；

(2)将所述血清代谢物与氘代试剂混合，将所得混合液依次进行涡旋振荡、超声和离心，得到上清液；取所述上清液进行核磁共振检测，得到¹HNMR谱图；所述氘代试剂中加入四甲基硅烷作为内标物。

优选地，所述阳性血清样本和阴性血清样本与甲醇的体积比分别为1:4～20。

优选地，所述磷酸盐缓冲液的pH值为2～8，浓度为0.05～3mol/L；所述阳性血清样本和阴性血清样本与磷酸盐缓冲液的用量比分别为1.0mL:50～200μL。