[发明专利]一种肝脏的超低温保存溶液及保存方法

说明书

本发明涉及临床医学肝脏移植技术领域，具体涉及一种肝脏的超低温保存溶液及保存方法。该超低温保存溶液包括加载溶液、低温保存液和复苏溶液；加载溶液包括Williams E培养基、3‑O‑甲基‑D‑吡喃葡萄糖和西洛酰胺；超低温保存液包括UW液、聚乙二醇和西洛酰胺；复苏溶液包括Williams E培养基和西洛酰胺。本申请采用3‑O‑甲基‑D‑吡喃葡萄糖、西洛酰胺和聚乙二醇联合对离体肝脏进行处理，对离体肝脏实现保护，能实现离体肝脏的零下‑6℃超低温保存，有效延长了供肝的有效保存时间为48‑72小时，解冻后的体外源代肝细胞具有良好的品质，显著减轻低温所致的肝组织损伤问题，提升肝移植疗效。

技术领域

本发明涉及临床医学肝脏移植技术领域，具体涉及一种肝脏的超低温保存溶液及保存方法。

背景技术

肝脏是人体内最大的消化腺，是体内物质能量代谢的中心站，是维持生命活动的一个必不可少的重要器官。而肝病是指发生在肝脏的病变，包括乙肝、甲肝、丙肝、肝硬化、脂肪化、肝癌、酒精肝等多种肝病，是一种常见的危害性极大的疾病。

治疗肝病的三大原则包括抗病毒、提高免疫力、恢复肝功能，而对于终末期肝病的最有效治疗方式是肝移植，肝移植的良好疗效取决于供肝的质量和临床技术水平。由于肝移植的供体严重匮乏，每年仅有0.6％的终末期肝病接受肝移植，因此临床上尤为重视肝脏移植技术，以利用有限的资源使患者得到良好的疗效，其中，移植前供肝的保存至关重要。

对于移植前供肝的保存，目前静态冷保存仍是肝脏保存最普遍的方法，但缺点是临床有效保存时间仅仅为8-10小时，迫使临床医生在供肝保存的8小时内完成肝移植手术。体外机械灌注肝脏是新近发展起来的肝脏保存技术，虽然该技术尽管可以改善供肝质量，并延长器官的有效保存时间为24小时，但因其技术复杂、价格昂贵、转运困难等缺点，使得其在临床应用上受到极大限制。

至今为止，除个别团队的报道外，肝脏的超低温保存鲜有成功报道，相关技术仍不成熟，很难形成统一的方案。因此，肝脏超低温保存液的成分尚需要进一步的改良与优化。这对于实现器官的体外长时间有效保存尤为重要，且有望进一步应用临床，解决目前肝移植领域供体器官紧缺和区域性分配等问题。

发明内容

为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种肝脏的超低温保存溶液及保存方法。

本发明的第一个目的通过下述技术方案实现：一种肝脏的超低温保存溶液，包括加载溶液、低温保存液和复苏溶液；所述加载溶液包括Williams E培养基、3-O-甲基-D-吡喃葡萄糖和西洛酰胺；所述超低温保存液包括UW液、聚乙二醇和西洛酰胺；所述复苏溶液包括Williams E培养基和西洛酰胺。

在肝脏低温保存方法中，从理论上讲，温度每降低10℃可使细胞代谢需求降低约50％，不仅如此，低温还能减少细胞凋亡、自由基的产生和促炎细胞因子的释放。利用这一原理，将离体肝脏的保存温度降低至零下的超低温保存条件，可使肝脏的生命代谢活动得到有效降低，可以有效延长离体肝脏的保存时间，保障肝脏质量并用于后续移植。

然而，由于肝脏解剖结构复杂，包含多种细胞类型，具有不同的保存特性和功能，使肝脏的超低温保存面临几个挑战：1)在储存过程中可能发生冰核；2)在零下温度下长时间的储存以及长时间的复温过程，会导致肝脏不可逆的质膜损伤以及随后的渗透不平衡；3)一般来说，低温和随后的复温会增加细胞产生自由基的敏感性，同时降低细胞对这种破坏性反应物种的自然防御能力，尤其影响肝窦功能，肝窦是肝脏直接与外界环境相互作用的功能单位，窦状内皮细胞(SECs)对低温极为敏感，低温会导致细胞肿胀和微循环破坏。而上述的几个问题均会引起肝组织损伤现象，影响肝脏质量。