[发明专利]一种细胞保存方法

说明书

本发明公布了一种细胞保存方法，包括细胞保存瓶、细胞保存液和细胞保存方法。细胞保存瓶具有A和B两个独立且密闭的腔室，细胞保存液由A液和B液组成,分别储存在细胞培养瓶的A腔室和B腔室中。细胞学标本序次经A液和B液处理后，能够完全去除标本中的红细胞、同时固定细胞并将细胞碎片溶解在缓冲系统中。该细胞保存方法制备的细胞涂片或切片细胞形态结构清晰，无红细胞及蛋白沉淀背景，易于做出病理诊断。

技术领域

该专利涉及细胞生物学领域，具体涉及一种细胞保存方法，特别是一种细针穿刺细胞的保存方法。

背景技术

细针穿刺（吸取）细胞学（FNA）是细胞病理学的重要发展方向，通过细针吸取人体细胞的方法，获得临床诊断标本，制备成细胞涂片以及细胞蜡块和细胞切片，并可进一步开展免疫组化和分子病理检测，对疾病进行明确诊断、分型、检测治疗靶点和预后判断指标。

FNA病理诊断技术具有微创、安全、简便等许多优点，理论上细针可以抵达人体的任一位置取样对疾病进行诊断，降低对疾病诊断的取样难度，但该技术也有明显的局限性，包括其获得的细胞（组织碎片）少，对其保存和处理的技术要求高，处理不当容易造成细胞退变、形态结构改变；标本中含有大量的红细胞，有时使用细针吸取细胞学标本制备的细胞涂片或细胞切片中只有极少量的诊断细胞，有时甚至只有红细胞没有诊断价值细胞； 诊断细胞被细胞碎片覆盖妨碍在显微镜下对细胞观察。因此，对于细针吸取细胞学标本，有效除去标本中的红细胞、细胞碎片以及及时对标本进行固定、防止细胞退变，是通过细针吸取细胞对疾病进行准确病理诊断的关键步骤。

目前，临床上有用于保存临床细胞学标本的液基细胞保存液和细胞保存方法，液基细胞保存液在保存宫颈脱落细胞及其制片技术上十分成熟，并在宫颈癌筛查上发挥了十分重要的作用。相似的液基细胞保存液也被应用于细针穿刺细胞的保存，主要有两类：一类是以甲醇、乙醇为基础的保存液，这类保存液不具有除去红细胞的功能；另一类是在醇类固定液中加入红细胞裂解试剂冰醋酸，冰醋酸是一种激烈的除去红细胞的方法，能够迅速除去标本中红细胞，但对诊断细胞也造成明显的损伤，使其形态结构改变；同时，裂解的红细胞碎片和及其释放的血红蛋白在醇类固定剂中会以沉淀形式存在，制片过程中无法除去，沉淀物的存在会遮挡显微镜下对细胞形态的观察。这样，这类细胞保存液保存的细胞制备的细胞涂片（切片），使依据细胞形态及其微细结构为依据的细胞病理学诊断变得很困难，有时甚至做出错误的诊断。

因此，需要研究具有同时固定目标细胞，裂解红细胞，并具有使细胞碎片、血红蛋白处于溶解状态的细胞保存方法。

发明内容

该发明涉及一种细胞保存方法，包括：（1）一种细胞保存瓶；（2）一种细胞保存液；（3）细胞保存方法。

细胞保存瓶具有A和B两个独立且密闭的腔室，有3种结构类型（1）上下结构细胞保存瓶；（2）左右结构细胞保存瓶；（3）两个腔室不相连。上下结构细胞保存瓶，指其A腔室位于B腔室上方，有2中连接方式，（1）A腔室拧紧在B腔室上，瓶盖拧紧在A腔室上，形成A、B两个独立的密闭空间；（2）A腔室套叠在B腔室内，瓶盖拧紧在B腔室的外壁上使A、B两个腔室分割为独立的密闭空间；左右结构的细胞保存瓶指细胞保存瓶并列有A、B两个腔室，两个腔室之间设有隔离层并低于保存瓶外壁，在靠近瓶口位置设有能够与A、B两个腔室内口相嵌合的密闭垫，瓶盖拧紧以后通过挤压密闭垫将A、B两个腔室分割为独立的密闭空间。

细胞保存液由A液和B液组成,分别储存在细胞培养瓶的A腔室和B腔室中 A液为0.1mol/L～0.2mol/L NH₄⁺、渗透压200mOsm/L～400mOsm/L、pH 6.0-8.0；B液为2%～6%甲醛、渗透压200mOsm/L～400mOsm/L、pH 6.0-8.0。