[发明专利]一种NK细胞保护运输液

说明书

本发明涉及免疫细胞技术领域，具体涉及一种NK细胞保护运输液。所述NK细胞保护运输液，包括如下组分：HEPES缓冲液、葡萄糖注射液、海藻糖溶液、人血白蛋白、芒果提取物和甘氨酸，具有适用于低温保存、细胞活性高、保存时间长、安全性高、运输成本低、操作简单的优点。

技术领域

本发明涉及免疫细胞技术领域，具体涉及一种NK细胞保护运输液。

背景技术

自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)作为机体固有免疫系统的细胞毒性淋巴细胞，在机体的免疫监视中扮演着非常重要的角色，在抗肿瘤及抗病毒的免疫应答中发挥重要作用。NK细胞识别靶细胞无MHC限制性，不需抗原激活，更不需抗体的协助，就可以直接识别，非特异性地杀伤靶细胞，例如杀伤被病毒感染的细胞和肿瘤细胞，且这种抗感染和抗肿瘤的杀伤作用是广谱的，属于天然免疫系统的重要细胞组成成分，具有免疫监视和免疫清除功能，是人体防御体系的第一道屏障。同时，还可以产生一系列的细胞因子，进而对机体的适应性免疫进行调节，是连接机体固有免疫和特异性免疫的桥梁。

近年来，随着对NK细胞活化及功能的深入研究，NK细胞免疫治疗肿瘤在临床上具有良好的应用前景，NK细胞过继免疫疗法也成为肿瘤治疗的新策略。

制备培养好的NK细胞在回输前一般有个运输的过程，如不回输给患者，一般则需冷冻保存。NK细胞制备扩增后如何保存运输是个问题，因为NK细胞从制备到使用需要一段时间，细胞处理完以后需马上输注(12小时内)，否则时间过长会影响细胞活性与品质。

NK细胞体外培养与临床使用时间节点有时不能有效衔接，如果延长培养时间会导致成本增加，同时培养时间超过最佳对数生长期后细胞的生长状态及活性会下降，从而影响细胞的活性与后续治疗质量，因此培养后的NK细胞如何保存成了必须考虑并解决的问题。

目前NK细胞运输方式通常有两种。一种是在冻结状态下，液氮冻存状态下进行运输，另一种是非冻结运输。两种方法都存在一些弊端。

液氮冻存状态下可维持细胞稳定性，冻存液中通常加入二甲基亚砜(dimathylsulfoxide，DMSO)。DMSO是一种细胞高毒性的化学试剂，会导致人体产生恶心，头痛，呕吐甚至休克的反应，在常规细胞培养中被严格控制在1％以下。但是，为了保护细胞，冻存液中的DMSO比例高达10％。

比如中国专利申请CN110100812A公开了一种免疫细胞的冻存回输液，此冻存回输液由0.9％的氯化钠生理盐水溶液和以下组分组成：5％-10％的二甲基亚砜(DMSO)，1％-3％的右旋糖酐，1％-5％的葡萄糖，5％-10％的人血清白蛋白(Human Serum Albumin，HSA)，50μg/mL-250μg/mL的维生素C和50μg/mL-150μg/mL的维生素E，0.5％的葡萄糖酸钠，0.03％-0.04％的氯化钾和0.03％-0.04％的氯化镁。

虽然在低温冻存条件下DMSO可以起到保护作用，但是复苏过程中，一旦细胞复温则会遭受不良环境，这也是细胞冻存和复苏过程中细胞死亡的一个主要原因。并且液氮状态下进行运输危险性高(液氮温度为-196℃)，细胞经过冻存后复苏过程中会引起细胞活性下降、对后续治疗造成影响。

非冻结运输。常温培养基下运输，但是培养液晃动，会导致细胞发生机械损伤。为保护细胞，需把培养瓶灌满培养液，才能安全运输，这样耗费培养基过多，体积较大，成本就会增加。对技术人员、操作环境及仪器的要求较高，使其应用受到限制。

为了降低运输成本，使操作简单化，同时保证细胞的活性和安全性，急需一种新的NK细胞运输方式——低温保存细胞。