[发明专利]ALV-J MHC-B2限制性表位肽的鉴定及其应用

说明书

本发明公开了ALV‑J MHC‑B2限制性表位肽的鉴定及其应用，属于基因工程技术领域。本发明公开了一种ALV‑J MHC‑B2限制性表位肽，所述ALV‑J MHC‑B2限制性表位肽的氨基酸序列为TVDTASSAI、FVDFANRLI或SALQAFREV。还公开了上述ALV‑J MHC‑B2限制性表位肽在制备ALV表位疫苗中的应用。本发明旨在通过体外结合洗脱实验确定鸡MHC I类分子B2单倍型结合多肽的限制性基序，并利用基序系统筛选ALV‑J表达的四种蛋白中潜在的表位，最终通过功能验证鉴定出具有免疫原性的B2单倍型鸡的ALV‑J T细胞表位肽，为ALV表位疫苗的研发提供物质和理论基础。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及ALV-J MHC-B2限制性表位肽的鉴定及其应用。

背景技术

禽白血病病毒(Avian Ieukosis virus，ALV)是属于反转录病毒科，甲型逆转录病毒属的禽类逆转录病毒，目前按照宿主范围、病毒囊膜蛋白的抗原差异性等可以分为11种亚型，其中J亚型禽白血病病毒感染会导致鸡只出现髓细胞性白血病、血管瘤等病变，自发现以来给养禽业造成了巨大的经济损失。J亚型禽白血病病毒和其他亚型的禽白血病病毒一样，其基因组由编码区和非编码区组成，编码区主要包括三个基因：衣壳蛋白基因(gag)、聚合酶基因(pol)和囊膜糖蛋白基因(env)，表达Gag、Pol、Gp85、Gp37四种蛋白。

I型主要组织相容性复合体表达于所有有核细胞表面，主要递呈细胞内经消化编辑后得到的抗原多肽以供下游的CD8+T细胞识别，进而激活机体的细胞免疫清除异常细胞。递呈的抗原多肽称为细胞毒性T细胞(CTL)表位，基于CTL表位研发的疫苗能使机体产生高水平的细胞免疫，是多种畜禽疾病疫苗研发的一个重要方向。已有报道证明CD8+T细胞在抵抗ALV感染的过程中发挥着关键作用，这说明研发能刺激机体产生细胞免疫的表位疫苗对ALV的防控具有重要意义。然而，目前ALV表位疫苗的相关报道甚少。

表位疫苗的制备需要筛选到具有免疫原性的多肽表位，而MHC I类分子与多肽的结合是多肽具有免疫原性的先决条件，因此，了解MHC I类分子结合表位的限制性基序对表位疫苗的研发具有重要意义。MHC I类分子具有多态性，不同倍型的MHC I类分子结合表位的限制性基序不尽相同，目前关于鸡MHC I类分子仅报道了B4、B12、B15、B19、B21单倍型的基序，未见关于B2单倍型基序的报道。但是MHC I类分子B2单倍型相比其他单倍型鸡更具有抵抗禽白血病病毒的能力，是进行ALV实验研究及疫苗开发的优良材料。因此筛选鉴定MHCI类分子B2单倍型结合多肽的限制性基序，并利用基序系统筛选获得ALV-J表达的具有免疫原性的多肽表位是十分有必要的。

发明内容

本发明的目的是提供ALV-J MHC-B2限制性表位肽的鉴定及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，通过本发明的鉴定方法最终获得具有显著免疫原性的B2单倍型鸡的ALV-J T细胞表位肽，其为ALV表位疫苗的研发提供物质和理论基础，对ALV的防控具有重要意义。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种ALV-J MHC-B2限制性表位肽，所述ALV-J MHC-B2限制性表位肽的氨基酸序列为TVDTASSAI、FVDFANRLI或SALQAFREV。

本发明还提供一种根据上述ALV-J MHC-B2限制性表位肽在制备ALV表位疫苗中的应用。

本发明还提供一种用于鉴定上述ALV-J MHC-B2限制性表位肽的方法，包括以下步骤：

(1)利用原核表达系统获得MHC I分子重链和轻链蛋白，将MHC I分子重链蛋白、轻链蛋白和随机肽库混合反应，获得MHC I-肽复合物；

(2)洗脱步骤(1)获得的MHC I-肽复合物，将洗脱下来的多肽经质谱测序及分析，确定多肽限制性表位基序，再根据基序筛选ALV-J病毒蛋白序列，得到候选多肽；