[发明专利]一种基于磁珠法快速提取血浆游离核酸的试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于磁珠法快速提取血浆游离核酸的试剂盒。所述试剂盒包括：裂解液、去蛋白漂洗液、去盐漂洗液、洗脱液及磁珠；所述裂解液含有2‑6M离液剂、0.05‑10%十二烷基硫酸钠、50‑200mM乙二胺四乙酸、10‑200mM三羟甲基氨基甲烷、50‑500mM氯化钠、0.1%‑5%十二烷基苯磺酸钠、1%‑5%月桂醇聚醚硫酸酯钠和5%‑15%非离子表面活性剂。本发明采用含有独特的裂解液组分及磁珠，无需加入蛋白酶K，能够有效提高核酸产量，从而提高下游NGS建库产量。

技术领域

本发明提供一种基于磁珠法快速提取血浆游离核酸的试剂盒，属于生物医药领域。

背景技术

血浆游离核酸，是指存在于人体血浆中游离在细胞外的部分降解了的机体内源性DNA。游离核酸检测广泛应用于无创产前筛查、肿瘤诊断及各类疾病检验中。

目前市场上对于从血浆中提取游离核酸的方法有很多，根据核酸提取原理分为沉淀法、柱膜离心法、磁珠法等，根据提取通量高低分为手工法和仪器法。

沉淀法：采用酚氯仿等有机试剂提取核酸。

柱膜离心法：DNA在高盐条件下与硅胶膜结合，在低盐、高pH值时DNA从硅胶膜上洗脱下来。

磁珠法：以超顺磁性的纳米磁性粒子为基质，这种磁性粒子在高浓度离液剂的条件下可通过氢键和静电特异的吸附核酸，而蛋白质或其它非特异吸附的少量杂质经洗涤被去除，最后用低盐缓冲液或 RNase Free ddH2O 洗脱核酸。

手工法：操作步骤均由手动操作。

仪器法：基于磁棒法原理的自动核酸提取仪。

传统的游离核酸提取试剂盒，通常采用沉淀法和柱膜离心法, 沉淀法需采用酚氯仿抽提，操作复杂，试剂毒性大，不宜使用。采用柱膜法需要配合离心机使用，操作复杂，核酸得率较低，且不能实现高通量核酸提取。

发明内容

本发明基于磁珠法进行核酸提取，提取试剂无酚氯仿等有机试剂，含有独特的裂解液组分，能够有效提高核酸质量。采用本发明独特核酸提取试剂，能够手工提取0.1ml-10ml的血浆，并且搭配32通道核酸提取仪可提取0.1ml-0.6ml的血浆游离核酸，搭配24通道核酸提取仪可提取1ml-8ml的血浆游离核酸，能够满足不同客户的需求。

本发明的目的是提供一种基于磁珠法提取血浆游离核酸的试剂盒。

本发明所提供的试剂盒包括：裂解液、去蛋白漂洗液、去盐漂洗液、洗脱液及磁珠；

所述裂解液含有2-6M离液剂、0.05-10%（100ml的裂解液中含有0.05-10g的十二烷基硫酸钠）十二烷基硫酸钠、50-200mM的乙二胺四乙酸、10-200mM的三羟甲基氨基甲烷、50-500mM 氯化钠、0.1%-5%十二烷基苯磺酸钠、1%-5%月桂醇聚醚硫酸酯钠和5%-15%非离子表面活性剂。

具体地，所述裂解液含有2-6M离液剂、1-5%（m/v）十二烷基硫酸钠、50-150mM乙二胺四乙酸、80-120mM三羟甲基氨基甲烷、80-120mM 氯化钠、1%-3%（m/v）的十二烷基苯磺酸钠、2%-4%（m/v）月桂醇聚醚硫酸酯钠和5%-15%非离子表面活性剂；

所述离液剂可为盐酸胍、异硫氰酸胍、尿素中的一种或几种的混合物，具体可为异硫氰酸胍；

所述非离子表面活性剂可选自：TritonX-100、Tween-20、Tween-80、NP40中的至少一种，具体可为TritonX-100；

更优选地，所述裂解液由以下物质组成：3mol/L异硫氰酸胍，2%十二烷基硫酸钠，100mmol/L乙二胺四乙酸，100mmol/L三羟甲基氨基甲烷，100mmol/L 氯化钠，2%十二烷基苯磺酸钠，2.5%月桂醇聚醚硫酸酯钠，8% TritonX-100；