[发明专利]一种小孢子培养获得纯合芦笋种质的方法

权利要求书

1.一种小孢子培养获得纯合芦笋种质的方法，其特征在于，包括选取花蕾，预处理，研磨，离心，一次培养，二次培养；

所述研磨，向预处理后的花蕾中加入6-8ml B5洗涤培养基进行研磨，过滤，收集滤液；再加入B5洗涤培养基清洗，所有清洗的B5培养基都过滤后作为滤液收集；

所述离心，将滤液进行第一次离心，第一次离心结束后倒掉上清液，进行重复离心，得到芦笋小孢子；然后向芦笋小孢子中加入NLN培养基混匀进行二次离心后，得到二次离心后的小孢子；

所述一次培养，使用NLN培养基将二次离心后的小孢子的密度调至1×10⁵-2×10⁵个/mL后得到悬浮液，分装后加入活性炭水溶液，封口；将小孢子悬浮液进行一次黑暗培养，然后继续二次黑暗培养后得到球状胚。

2.根据权利要求1所述的小孢子培养获得纯合芦笋种质的方法，其特征在于，所述预处理，将选取的花蕾密封后进行低温预处理，再进行一次消毒，二次消毒后用无菌水进行浸泡震荡清洗，得到预处理后的花蕾。

3.根据权利要求1所述的小孢子培养获得纯合芦笋种质的方法，其特征在于，所述过滤中使用45-48μm孔径的尼龙筛网。

4.根据权利要求1所述的小孢子培养获得纯合芦笋种质的方法，其特征在于，所述研磨过程中的清洗，共清洗2-4次，每次B5洗涤培养基的用量为4-6ml。

5.根据权利要求1所述的小孢子培养获得纯合芦笋种质的方法，其特征在于，所述第一次离心，温度为4-6℃，离心时的转速为1000-1200rpm，离心时间为4-6min。

6. 根据权利要求1所述的小孢子培养获得纯合芦笋种质的方法，其特征在于，所述重复离心，加入12-14ml B5培养基洗涤混匀后继续离心，重复离心操作3-5次。

7.根据权利要求1所述的小孢子培养获得纯合芦笋种质的方法，其特征在于，所述二次离心的温度为4-6℃，转速为1000-1200rpm，二次离心时间为4-6min。

8.根据权利要求1所述的小孢子培养获得纯合芦笋种质的方法，其特征在于，所述一次培养步骤中悬浮液与活性炭水溶液的体积比为2000-3000：10-12。

9.根据权利要求1所述的小孢子培养获得纯合芦笋种质的方法，其特征在于，所述一次黑暗培养的温度为32-35℃，培养时间为1-1.5天。

10.根据权利要求1所述的小孢子培养获得纯合芦笋种质的方法，其特征在于，所述二次黑暗培养的温度为25-28℃，培养时间为3-4周。