[发明专利]一种检测Aβ聚集状态的电化学传感器及制备方法与应用

权利要求书

1.一种检测淀粉样多肽聚集状态的电化学传感器，其特征在于，所述的电化学传感器包括金电极；所述的金电极经过预处理后修饰有11-巯基烷酸和Aβ42单体；Aβ42单体诱导Aβ42寡聚体的生成。

2.一种检测淀粉样多肽聚集状态的电化学传感器的制备方法，其特征在于，具体包括步骤有：

（1）预处理金电极；预处理后的金电极在铁氰化钾/亚铁氰化钾溶液中ΔEP≤90mV；

（2）将预处理后的金电极放入含有11-巯基烷酸和20μM三(2-氯乙基)磷酸酯的乙醇溶液中反应；

（3）将步骤（2）中反应后的金电极放入含有Aβ42和1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺/ N-羟基琥珀酰亚胺的水溶液中浸泡反应；

（4）将Aβ42溶液滴加在步骤（3）中反应后金电极表面，低温孵育后用去离子水冲洗，氮气干燥；随后将金电极放入乙醇胺溶液中浸泡，去离子水冲洗后氮气干燥得到修饰有Aβ42寡聚体的金电极，即检测淀粉样多肽聚集状态的电化学传感器。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述的预处理步骤包括：将金电极浸泡在食人鱼溶液中去除有机物后用去离子水冲洗，将电极表面抛光；抛光后的金电极放入硫酸溶液中以-0.4mV到1.6 mV的电压扫描CV 20圈；再将金电极放入铁氰化钾/亚铁氰化钾溶液中以-0.2到0.6 V的电压扫描CV。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述乙醇溶液中11-巯基烷酸和三(2-氯乙基)磷酸酯的浓度均为20 μM，所述的反应条件为：4℃黑暗环境下反应至少6个小时。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，进一步地，步骤（3）中所述水溶液中Aβ42的浓度为0.4 μM，所述水溶液中1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺/ N-羟基琥珀酰亚胺的浓度为2 μM；所述浸泡反应的条件为室温黑暗环境下反应至少12个小时。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中所述Aβ42溶液为Aβ42以2.2mM的浓度溶于DMSO中，再用PBS缓冲液稀释至250 μM；所述低温孵育的温度为4℃，时间为至少24小时。

7.一种Aβ42寡聚体状态的检测方法，其特征在于，所述的检测方法以修饰有Aβ42单体的金电极为工作电极，以Ag/AgCl参比电极，铂丝作为对电极；将工作电极放入加有水溶性富勒烯和NaClO4的PBS电解液的电解杯中，对电极进行照射，照射过程中利用循环伏安法和方波伏安法进行Tyr-10残基电氧化信号的电化学测试，通过电化学状态表征Aβ42寡聚体状态。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述循环伏安法的参数为：扫描电压从-0.2 V到0.6 V，扫速50 mV；所述方波伏安法的参数为：扫描电压从0.2 V到0.8 V，电位增量5 mV，振幅25 mV。

9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述循环伏安法的测量在K₃[Fe（CN）₆]/ K₄[Fe（CN）₆]SWV溶液中进行，方波伏安法在NaClO₄的PBS溶液中进行。

10.权利要求1所述的电化学传感器在阿尔茨海默病药物研发领域中的应用。