[发明专利]一种基于超纯固膜技术的植物外泌体复合物的制备方法

说明书

本说明提供一种基于超纯固膜技术的植物外泌体复合物的制备方法，所述超纯固膜技术制备方法使用超速离心及多重过滤相结合的方式获取植物外泌体后，按照一定比例添加固膜成分甘露糖醇、海藻糖及麦芽糊精后制备成植物外泌体复合物，通过该种方式获得的植物外泌体粒径相对统一、纯度较高、活性成分及结构更为稳定。

技术领域

本发明属于细胞制备技术领域，尤其涉及一种基于超纯固膜技术的植物外泌体复合物的制备方法。

背景技术

研究发现，自然界的大多数生物(动物、植物和某些细菌)细胞能够分泌由磷脂双分子膜包裹的纳米级囊泡状结构。

现有植物外泌体分离提取技术以超速离心为主，获取的植物外泌体纯度较低、粒径大小不均一；并且在进行超速离心前，多次差速离心去除杂质及细胞碎片的过程会对外泌体造成一定程度的损伤。此外为了获取更高纯度植物外泌体进行后续实验，均采用蔗糖密度梯度离心过程进行纯化获取两个条带区间内的植物外泌体。虽然该过程获取的植物外泌体粒径更统一、纯度更高，但是这样密度梯度离心存在操作更复杂、耗时更长且外泌体损失更多的劣势。

发明内容

鉴于此，本发明提供了一种基于超纯固膜技术的植物外泌体复合物制备方法，为后续植物外泌体在美容、护肤等领域的应用提供了新思路。

为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：

一种基于超纯固膜技术的植物外泌体复合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

S1：通过榨汁方式获取植物组织匀浆；

S2：将S1获得的匀浆进行初次过滤；

S3，将S2得到的过滤液进行高速冷冻离心获取上清液；

S4，将S3获得的上清液进行一次超速离心，并采用无菌生理盐水进行重悬；

S5，将S4重悬沉淀后的产物进行二次超纯过滤；

S6，将S5超纯过滤后的产物进行二次超速离心后，重悬沉淀得到植物外泌体；

S7：在S6得到的植物外泌体中按照比例添加一定比例的固膜成分，制备得到植物外泌体复合物。

与现有技术相比，本发明通过将超速离心与多重过滤相结合的方式，在最大程度下优化提取时间、提高植物外泌体的纯度，得到的植物外泌体粒径大小统一、纯度更高。此外，在植物外泌体中添加一定比例固膜成分，有助于维护植物外泌体的结构及活性稳定性。为后续植物外泌体这一成分在美容、护肤等领域的应用提供了新思路。针对可食用植物来源植物外泌体复合物，除了以液体形式应用外，还可以冻干粉形式应用于护肤品和食品领域。本发明的超纯固膜得到植物外泌体的技术可称为Ultra Purification Strengthenexosome，简称UPSexo。

在其中一个实施例中，所述S1中的植物组织匀浆可通过榨汁或者搅拌的方法进行，所述S2中的过滤方式为螺旋挤压方式。

在其中一个实施例中，所述S3中的高速冷冻离心力为大于等于15000g，优选为15000-17000g，离心时间为60-90min。

在其中一个实施例中，所述S4的超速离心力为大于等于100000g，优选为100000g-150000g，离心时间70-90min，随后用无菌生理盐水重悬。

在其中一个实施例中，所述S5使用滤膜对S4进行重悬沉淀后的产物进行二次超纯过滤。

在其中一个实施例中，所述S7中添加的固膜成分为甘露糖醇、海藻糖及麦芽糊精的组合物，所述组合物的质量分数为：5％甘露糖醇、2％-1％海藻糖及0.5％-1％麦芽糊精。

在其中一个实施例中，所述植物外泌体来源自新鲜植物。