[发明专利]一种美沙拉秦灌肠液中苯胺的测定方法

说明书

本发明提供一种美沙拉秦灌肠液中苯胺的测定方法，它包括如下步骤：制样、检测等前处理步骤，其HPLC检测条件为：以磷酸盐缓冲液(用稀氢氧化钠溶液调节pH至8.0)‑乙腈(90:10)为流动相，检测波长为235nm，流速每分钟1.0ml，柱温30℃。精密量取供试品溶液及对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算含量。本发明提供的美沙拉秦灌肠液中苯胺的测定方法，能够实现对美沙拉秦灌肠液中苯胺的快速、准确、高重现性、高回收率的测定，比BP标准中苯胺的测定方法灵敏度高、精密度、准确度及稳定性好。苯胺测定方法的准确性、重复性、线性关系、稳定性等能达到科研和生产的要求，适用于推广应用，对控制美沙拉秦灌肠液的质量具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及到一种美沙拉秦灌肠液中苯胺的测定方法，该方法采用高效液相色谱法测定美沙拉秦灌肠液中苯胺的含量。

背景技术

溃疡性结肠炎是一个全世界都有的疾病，近年来，溃疡性结肠炎的发病率在我国有增高趋势，临床上多采用柳氮磺胺吡啶(SASP)治疗，虽然有一定疗效，但其副作用发生率较高，且对磺胺过敏者不能应用。美沙拉秦最早由德国霍克大药厂研制成功并投放市场，与SASP相比，其主要化学结构在于保留了5-氨基水杨酸有效成份，去除了磺胺吡啶基团，因此克服了SASP的缺点，是治疗溃疡性结肠炎的一种新药，已在西方国家广泛应用。目前由于人们生活环境恶化和生活习惯等诸多因素影响，溃疡性结肠炎发病率在逐年增加，在美沙拉秦问世前，没有更好的药物用于治疗溃疡性结肠炎，美沙拉秦问世后，以其良好的疗效和不良反应少等优势，在临床上不断推广。

美沙拉秦的主要药理作用在于直接抑制结肠过氧化物酶，抑制炎症介质，包括前列腺素、白三烯等的合成和释放；抑制血小板活化因子的活性；清除自由基，降低肠道黏膜的损伤及刺激，且避免了SASP的副作用，适用于SASP、糖皮质激素无效或不耐受的患者。从缓解症状、结肠镜下改变，其有效率明显高于SASP。另外，还可明显降低患者血清中TNF-а和IL-8水平，这可能是其治疗溃疡性结肠炎的作用机制之一。

美沙拉秦的抗炎作用机制尚不完全清楚。体外研究显示美沙拉秦对肠黏膜前列腺素的含量有一定影响，具有清除活性氧自由基的功能，对脂氧合酶可能起到一定的抑制作用。

美沙拉秦灌肠液采用直肠给药的方式，提高用药的顺应性；直肠给予美沙拉秦灌肠液后，美沙拉秦主要局部作用于肠黏膜和粘膜下层组织，对溃疡性结肠炎起到良好的治疗作用。

苯胺主要是美沙拉秦合成过程中带入未反应完全的起始原料。与药品质量和安全性密切相关，苯胺是一种胺类物质，主要引起高铁血红蛋白血症和肝、肾及皮肤损害，可能产生遗传毒性；因此，必须通过适当的检测分析方法控制药物中苯胺的含量，确保药品质量。

目前已有BP标准中苯胺测定方法为：精密称取本品适量(约相当于美沙拉秦50mg)，加流动相溶解并稀释制成每ml约含美沙拉秦2mg的溶液，作为供试品溶液。精密称取苯胺对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.01μg的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，磷酸盐缓冲溶液(取磷酸二氢钾1.41g和磷酸氢二钠0.37g，加水溶解并稀释至1000ml，用1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至8.0)-甲醇(85:15)为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长205nm，柱温40℃，精密量取对照品溶液和供试品溶液各50μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。测定美沙拉秦灌肠液中苯胺的波长是205nm，吸收主要在紫外末端，测定时可能受到干扰，无法准确测定苯胺含量；供试品的配制为直接取样品用流动相稀释配制，美沙拉秦灌肠液中含有多种辅料及美沙拉秦原料，同时苯胺的控制限度较低，测定时可能干扰苯胺的测定，影响苯胺含量的准确性。

发明内容

本发明的目的是提供了一种具有测定准确，重现性好，操作简单、分析速度快的新的测定美沙拉秦灌肠液中苯胺的测定方法。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：美沙拉秦灌肠液中苯胺的测定方法，包括以下步骤：