[发明专利]用修饰酶产生取代大麻素和前体的方法和细胞

权利要求书

1.一种在产生植物大麻素或植物大麻素前体的宿主细胞中产生取代的植物大麻素或取代的植物大麻素前体的方法，所述方法包括：

用编码用于用取代基衍生化所述植物大麻素或所述植物大麻素前体的酶的序列转化所述宿主细胞，以及

培养所述转化的宿主细胞以产生所述取代的植物大麻素或所述取代植物大麻毒素前体，

其中：

所述衍生化包括：

(i)O-甲基化，其中所述取代基为O-甲基，并且用于衍生化的所述酶包含选自OMT1-OMT30蛋白的O-甲基化酶，所述OMT1-OMT30蛋白包含与SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:30中任一个示出的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；

(ii)糖基化，其中所述取代基为糖基，并且用于衍生化的所述酶包括选自GLY1-GLY11蛋白的糖基化酶，所述GLY1蛋白包含与SEQ ID NO:31-SEQ ID NO:41中任一个示出的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；或

(iii)卤化，其中所述取代基为卤素，并且用于衍生化的所述酶包括选自HAL1-HAL20蛋白的卤化酶，所述HAL1-HAL20蛋白包含与SEQ ID NO:42-SEQ ID NO:62中任一个示出的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其中：

所述植物大麻素为THCa并且所述取代基为O-甲基；

所述植物大麻素为CBGa并且所述取代基为糖基；或

所述植物大麻素前体为橄榄醇酸并且所述取代基为卤素。

3.一种在产生植物大麻素或植物大麻素前体的宿主细胞中产生取代的植物大麻素或取代的植物大麻素前体的方法，所述方法包括：

用编码用于用取代基衍生化所述植物大麻素或所述植物大麻素前体的酶的序列转化所述宿主细胞，以及

培养所述转化的宿主细胞以产生所述取代的植物大麻素或所述取代植物大麻毒素前体。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述衍生化包括O-甲基化、糖基化或卤化。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述编码的酶包括下述或由下述组成：

(a)选自包含(i)SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:30中任一个示出的氨基酸序列的OMT1-OMT30蛋白的O-甲基化酶；(ii)选自包含SEQ ID NO:31-SEQ ID NO:41中任一个示出的氨基酸序列的GLY1-GLY11蛋白的糖基化酶；和(iii)选自包含SEQ ID NO:42-SEQ IDNO:62中任一个示出的氨基酸序列的HAL1-HAL20蛋白的卤化酶；

(b)包含与(a)中示出的蛋白具有至少70％同一性的氨基酸序列的酶；

(c)包含由于替换、缺失和/或插入的一个或多个氨基酸残基而不同于(a)中示出的蛋白的氨基酸序列的酶；或

(d)作为(a)、(b)或(c)的衍生物的酶。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述O-甲基化酶包含与(a)中示出的氨基酸序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

7.根据权利要求5所述的方法，其中所述O-甲基化酶包含与(a)中示出的氨基酸序列具有至少85％或至少95％同一性的氨基酸序列。

8.根据权利要求3所述的方法，其中编码所述酶的序列包含下述或由下述组成：编码SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:62中任一个的核苷酸序列或编码与其具有至少70％同一性的酶的核苷酸序列。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述核苷酸序列编码与SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:62中任一个具有至少85％或至少95％序列同一性的酶。

10.根据权利要求3至9中任一项所述的方法，其中所述植物大麻素为酸。