[发明专利]软骨组织体的制造方法

说明书

本发明提供软骨组织体的制造方法，其特征在于，包括下述工序：提供细胞凝集块制造用基板的工序，所述细胞凝集块制造用基板在具有抑制细胞附着的能力的基板上具备由包含由下述式(I)及(II)表示的单体衍生的重复单元的共聚物形成的多个点部；在该基板上接种来自多能干细胞的PRRX1蛋白阳性的人软骨祖细胞的工序；对该细胞进行培养从而制成细胞凝集块的工序；对该凝集块进行培养从而制成软骨组织体的工序。式中，Usupgt;a1/supgt;、Usupgt;a/supgt;、Rsupgt;a1/supgt;、Rsupgt;a2/supgt;及Rsupgt;b/supgt;如说明书及权利要求书中记载的那样。

技术领域

本发明涉及软骨组织体的制造方法。

背景技术

在作为关节软骨损伤的治疗之一的移植自行培养软骨组织的方法中，需要软骨采集和培养软骨移植这2次手术，因此患者的负担大。从减轻该患者负担等的观点考虑，提出了并非自行培养而是经由各种干细胞的分化诱导·培养来制作用于移植的软骨组织的各种再生医疗技术。例如，报道了下述技术：将人工多能干细胞(iPS细胞)诱导成中胚层，在抗坏血酸、BMP2、TGFβ、GDF5的存在下进行培养，由此使皿上的一部分细胞形成软骨细胞凝集物，将其剥离，进行悬浮培养，由此制作出透明软骨组织(例如，参见非专利文献1)。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：A.Yamashita,M.Morioka,Y.Yahara,M.Okada,T.Kobayashi,S.Kuriyama,S.Matsuda,N.Tsumaki,人iPSCs无支架透明软骨组织的制备(Generation ofscaffoldless hyaline cartilaginous tissue from human iPSCs),干细胞报告(Stemcell reports)4(2015)404-418

发明内容

发明所要解决的课题

通过上述技术，能够由人多能干细胞制作出作为最终产物的透明软骨组织，但并未规定中间阶段的细胞(＝人软骨祖细胞)。因此，存在难以以高效率大量生产组织形状/性状均匀化的软骨再生材料这样的课题。

用于解决课题的手段

本申请的发明人对此前由干细胞制作软骨组织时的中间阶段的细胞及其制造方法、和由该细胞制造软骨组织的方法进行深入研究，对其中的一部分也进行了专利申请(例如，参见PCT/JP2020/035517)。通过该方法，可以对中间阶段的具有分化指向性的细胞(即，软骨祖细胞)进行扩大培养并进行原种(stock)化，可以通过对经品质管理的同批次的细胞进行软骨分化诱导处理从而制成软骨组织，另外，所制作的软骨组织中不包含软骨细胞以外的细胞，因此，从将软骨组织体用于再生医疗的方面来看是有利的。本发明发现通过在规定的培养条件下实施这样的源自软骨祖细胞的软骨组织的制作，能够进行高效的细胞增殖、并且由少数的细胞制作大的软骨组织片，从而完成了本发明。

本发明包括以下方案。

[1]软骨组织体的制造方法，其特征在于，包括下述工序：

提供细胞凝集块制造用基板的工序，所述细胞凝集块制造用基板在具有抑制细胞附着的能力的基板上具备由包含由下述式(I)表示的单体衍生的重复单元、及由下述式(II)表示的单体衍生的重复单元的共聚物形成的多个点部；在该基板上接种来自多能干细胞的PRRX1蛋白阳性的人软骨祖细胞的工序；对该细胞进行培养从而制成细胞凝集块的工序；对该凝集块进行培养从而制成软骨组织体的工序。

[化学式1]

[式中，