[发明专利]生物素-链霉抗生物素蛋白裂解组合物和文库片段裂解

说明书

生物素‑链霉抗生物素蛋白裂解组合物的一个示例包含甲酰胺试剂和盐缓冲液。基于所述生物素‑链霉抗生物素蛋白裂解组合物的总体积，所述甲酰胺试剂以约10％至约50％范围内的量存在于所述生物素‑链霉抗生物素蛋白裂解组合物中。所述盐缓冲液构成所述生物素‑链霉抗生物素蛋白裂解组合物的余量。在一些示例中，使用所述生物素‑链霉抗生物素蛋白裂解组合物从固体支持物裂解文库片段。在其他示例中，使用其他机制从固体支持物裂解文库片段。

相关申请的交叉引用

本申请要求2020年2月3日提交的美国临时申请序列号62/969,440的权益，该临时申请的内容全文以引用方式并入本文。

背景技术

生物阵列是用于检测、分析和/或纯化分子(包括蛋白质、核酸等)的广泛工具之一。在一些应用中，这些阵列被工程化为包括可以捕获所关注分子的探针。在其他应用中，这些阵列被工程化为具有结合对的一个成员，并且所关注分子用结合对的另一个成员标记或加标。结合对的示例包括生物素和抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白。抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白对生物素的亲和力是最强非共价生物相互作用之一。此外，生物素标记很少干扰标记分子的功能。这些特性使生物素和抗生物素蛋白或生物素和链霉抗生物素蛋白特别适用于各种生物应用。

在一些生物应用中，希望以条件和受控方式拴系或连接所关注分子，其中拴系或连接在特定时间被裂解，并且被裂解的所关注分子的解离受到控制。在一些情况下，生物素和抗生物素蛋白或生物素和链霉抗生物素蛋白相互作用的强度可使条件和/或受控裂解变得困难。

发明内容

本文公开了可用于从文库片段所附接的固体支持物裂解这些文库片段的组合物和方法。一种示例组合物能够快速且有效地裂解生物素-链霉抗生物素蛋白键。另一种示例组合物在允许空间释放文库片段的条件下被激活。一种示例方法涉及从固体支持物两步释放文库片段。两步释放的裂解机制是正交的，因此第一裂解机制是不稳定的，而第二裂解机制是稳定的。第二裂解机制允许空间释放文库片段。

所述组合物和方法可用于流通池上。本文所公开的示例中的每一个可以用于流通池表面上，而不会对流通池表面上的化学物质(例如，聚合水凝胶、扩增引物等)产生有害影响。

本文所公开的第一方面是一种生物素-链霉抗生物素蛋白裂解组合物，包含：约10体积％至约50体积％的甲酰胺试剂；以及余量的盐缓冲液。

本文所公开的第二方面是一种生物素-链霉抗生物素蛋白裂解组合物，由以下项组成：约10体积％至约50体积％的甲酰胺试剂，所述甲酰胺试剂包含甲酰胺和任选的缓冲液；以及余量的盐缓冲液，所述盐缓冲液包含氯化钠、柠檬酸钠和生物相容性表面活性剂。

本文所公开的第三方面是一种方法，包括：将文库片段引入流通池中，其中所述文库片段附接到链霉抗生物素蛋白涂覆的固体支持物；将生物素-链霉抗生物素蛋白裂解组合物引入到所述流通池中，所述生物素-链霉抗生物素蛋白裂解组合物包含约10体积％至约50体积％的甲酰胺试剂和余量的盐缓冲液；以及使所述生物素-链霉抗生物素蛋白裂解组合物在约60℃至约70℃范围内的温度下在所述流通池中温育，从而致使所述文库片段中的至少一些文库片段从所述固体支持物释放并且接种到所述流通池的表面上的扩增引物上。

本文所公开的第四方面是一种试剂盒，包括：链霉抗生物素蛋白涂覆的固体支持物；接头序列，在所述接头序列的一端处附接有生物素，其中所述生物素将附接到所述链霉抗生物素蛋白涂覆的固体支持物；样品流体，所述样品流体包含将片段化并附接到所述接头序列的基因组序列；以及生物素-链霉抗生物素蛋白裂解组合物，所述组合物包含约10体积％至约50体积％的甲酰胺试剂和余量的盐缓冲液。