[发明专利]一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）及含有该菌株的土壤改良剂

说明书

本发明“一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)及含有该菌株的土壤改良剂”，涉及土壤改良技术，所述菌株的保藏号为CGMCC No.22965；其16SrRNA内具有Seq ID No.3所示的特征序列；其发酵产物可作为土壤脲酶促进剂、有机污染改良剂。

技术领域

本发明涉及土壤改良技术，特别是含有特定枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株的土壤改良剂。

背景技术

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，为革兰氏阳性的好气性菌，普遍存在于土壤、植物体表以及在人体内。枯草芽孢杆菌菌体生长过程中会产生不同水平的多种代谢产物，比如枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽、α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、B族维生素等，一些优良菌种根据其特性被制成动物体(人体)益生菌、饲料添加剂、污水处理剂、生物肥发酵、土壤改良剂等产品，并得到广泛应用。

在土壤改良和调节方面，枯草芽孢杆菌的应用已经比较成熟，比如抑制农作物对硝态氮、重金属、农药的吸收，净化和修复土壤，降低农作物病害发生，促进农作物秸秆和城市垃圾的腐熟利用等。但是枯草芽孢杆菌制剂产品的品质和功效主要依赖于菌种本身的特性，筛选到好的菌种是提供优质产品的前提。菌种在传代过程中可能会发生退化、变异等，因此，有必要持续开发筛选优良菌种，作为枯草芽孢杆菌制剂产品提供候选材料。

发明内容

发明人在研发过程中偶然分离到一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，经试验检测发现其具理想的内切纤维素酶(CMCA)活力和滤纸酶(FPA)活力,其发酵液对多种土壤有害微生物具有抑制/溶菌作用，促进植物生长，并且对多环芳烃污染土壤中具有显著的净化作用，是优良的土壤改良剂候选微生物，因此将该分离菌株送至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，据此请求保护一下技术方案：

本发明的第一方面，提供一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)KC202015-6，保藏号为 CGMCC No.22965；其16SrRNA内存在Seq ID No.3所示的特征序列。

本发明的第二方面，提供一种含上述枯草芽孢杆菌及其代谢产物的发酵剂。

本发明的第三方面，提供上述发酵剂的制备方法，其特征在于

(1)将菌种进行斜面培养活化、再用无菌水冲洗斜面，形成菌悬液，

(2)在预装有1号液体培养基的容器中按照菌悬液与1号液体培养基的体积比1：20接种所述菌悬液，摇床培养8-10小时，培养条件为37摄氏度，180-220rpm的一级菌种液；

(3)将所述一级菌种液接种到预装有2号液体培养基的容器中进行扩繁，接种比例为体积比1:20；摇床培养8-10小时，培养条件为37摄氏度，180-220rpm的二级菌种液；

(4)将二级菌种液全部接种到预装有3号液体培养基的发酵罐中进行进一步发酵扩繁，接种比例为体积比1:20；发酵条件为：36-38摄氏度，罐压0.5kg/cm，通气量20立方/h，10-15 小时，得发酵剂；

所述斜面培养基配方为:海藻酸钠2g/L，蛋白胨5g/L，磷酸二氢钾0.5g/L、磷酸氢二钾2g/L,氯化钠3g/L，牛肉膏5g/L，琼脂1.5％-2.0％，PH调至6.5-7.2。

所述1号液体培养基配方为:海藻酸钠2g/L，蛋白胨5g/L，磷酸二氢钾0.5g/L、磷酸氢二钾1.5g/L,氯化钠3g/L，牛肉膏5g/L，PH调至6.5-7.2。

所述2号液体培养基:海藻酸钠2g/L，淀粉5g/L，蔗糖1g/L，酵母浸出汁0.2g/L，蛋白胨5g/L，牛肉膏5g/L，硫酸铵1g/L，磷酸二氢钾0.5g/L、磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.2g/L, 氯化钠5g/L，PH调至6.5-7.2。