[发明专利]一种对线虫实施微电极检测的实施方法

说明书

本发明公开了一种对线虫实施活体在体的微电极检测的实施方法，使用PDMS微流控芯片微通道吸附线虫固定法，将线虫吸附固定，当切开PDMS芯片，线虫得以暴露，显微操作可以实施。所述的微流控芯片包括一个可以实施微电极的凹槽及线虫进样通道；使用该微流控芯片进行线虫吸附固定，线虫一端被吸入通道，半部分虫体被吸附固定在芯片之外，微电极可以直接触及虫体；在凹槽内填充线虫专用M 9缓冲溶液，以保持线虫活性。使用显微注射操作系统将微电极插入线虫体内目标位置即可进行检测工作。本发明的对线虫实施微电极检测的实验方法可以方便的实现线虫抓捕、固定及微电极检测。

技术领域

本发明属于微流控芯片分析技术及模式动物线虫研究领域，具体涉及一种对线虫实施微电极检测的实施方法。

背景技术

模式动物秀丽隐杆线虫(C.elegans)易于培养，个体微小，结构简单，生长繁殖迅速，体态透明，与高等动物基因组有较高的同源性，可进行分子生物学操作，是研究发育生物学、遗传学和基因组学的重要模式动物。线虫成虫体长1毫米，宽度约为80微米，常规器材难以对其进行固定观察、显微操作、捕捉等。蓬勃发展的微流控芯片技术以其在微纳尺度出色的操控能力，已经广泛应用于对微尺度模式动物线虫的操作控制，例如线虫固定、成像分析、激光烧蚀、分选、药物刺激以及本人于2013年发表的微流控芯片上线虫显微注射技术等，微流控芯片技术的出现极大得促进了线虫研究技术的发展。

自上世纪60-70年代，微电极技术兴起，微电极插入细胞内可以记录其电活动，使电生理技术达到细胞水平。微电极检测可以记录到细胞膜上单个离子通道的电流，接近了分子水平。微电极的尖端直径可小于1微米，一般由玻璃管及金属丝制作成，形状与线虫显微注射用针相似。微电极可用作生物传感器，可快速测定抗原，乙酰胆碱，尿素等；可用于检验食品新鲜度；可用于检测水中的重金属离子等。

我们可以使用微流控芯片进行线虫固定，实施微电极分析技术。

发明内容

发明目的：为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种对线虫实施微电极检测的实施方法。

技术方案：一种对线虫实施微电极检测的实施方法，使用微通道吸附线虫固定法，将线虫吸附固定，所述的微流控芯片包括一个可以实施微电极的凹槽及线虫进样通道，具体操作如下：在微流控芯片上挖个凹槽让本处于通道内的线虫暴露出来，便可以使用微电极的插入及检测工作；

使用该微流控芯片进行线虫吸附固定，线虫头部可被吸入通道，前半部分被吸附固定在芯片之外，微电极可以直接触及虫体；具体地：线虫从进样通道进入凹槽，但并非整体进入，仅进入半身，被牢固吸附，另一半依然留在通道内，自由状态。进样过程中可以通过进样通道上方侧面吸附通道调头，进样通道下方为缓冲通道与凹槽的溶液连通，使得线虫在通道出口处移动速度可控，便于操作；

在凹槽内填充线虫专用M 9缓冲溶液，以保持线虫活性；

使用显微注射操作系统将微电极插入线虫体内目标位置即可进行检测工作。

作为优化：线虫所在通道为进样通道，高度为80微米，宽为140-200微米，进样通道上方是用来吸附捕捉线虫端部，并进行调头的侧面吸附通道，高度为35微米，宽度为20微米；下方为分流通道与凹槽连通，进样时液流经此分流通道，会减缓进样速度，进样速度可控；进样通道出口处凹槽内，侧面有并排的5个吸附通道，各个通道高度为35微米，宽度为20微米；还有一个端部吸附通道，开口处高度为35微米，宽度为20微米。

有益效果：本发明的对线虫实施微电极检测的实验方法可以方便的实现线虫抓捕、固定及微电极检测。当切开PDMS芯片，线虫得以暴露，显微操作可以实施。

附图说明

图1是本发明的对线虫实施微电极检测的实验装置的结构实物图，标尺长度为360微米；

图2是本发明的对线虫实施微电极检测的实验实物图，标尺长度为100微米。

具体实施方式