[发明专利]一种睾丸管周肌样细胞的生物标志物及其应用

说明书

本发明公开了一种睾丸管周肌样细胞的生物标志物及其应用。所述生物标志物包括ITGA9蛋白。基于ITGA9蛋白，制备鉴定睾丸管周肌样细胞的试剂盒，利用抗ITGA9蛋白抗体特异性识别结合管周肌样细胞，再通过如流式分析等方法可有效鉴定睾丸管周肌样细胞，此外，鉴定睾丸管周肌样细胞后即可将其与Leydig细胞进行区分，进而能够有效分离两种细胞，解决了常规分步消化、差异贴壁和梯度离心等方法难以将两者分离的问题，能够分离纯化得到高纯度的Leydig细胞以及高纯度的管周肌样细胞。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种睾丸管周肌样细胞的生物标志物及其应用。

背景技术

睾丸是人体中组成成分最复杂的器官之一，包括：①由管周细胞、支持细胞和各级生精细胞组成的生精小管；②由Leydig细胞和免疫细胞等组成的睾丸间质；③由内皮细胞和血管平滑肌细胞组成的脉管系统等。其中，Leydig细胞是男性产生雄激素的最主要细胞，Leydig细胞的功能障碍可导致生精障碍和雄激素下降引起的全身症状，充分理解Leydig细胞的各项生理病理过程对于研究男性健康具有重要意义。此外，管周肌样细胞对于睾丸功能同样十分重要，是维持生精小管形态和活动性的主要细胞组分，近年来，管周肌样细胞的旁分泌功能也受到关注，学者普遍猜测管周肌样细胞对于睾丸局部生精微环境的稳态也十分重要。

在生命科学领域，分离、纯化和体外培养是研究某种类型细胞功能的必要手段，然而，最近的研究表明Leydig细胞和管周肌样细胞有着共同的分化谱系，两者的基因表达谱也十分相似，此外，在体外培养体系中，两者均为贴壁生长，难以通过分步消化、差异贴壁和梯度离心等方法将两者分离，如CN101191124公开了一种Leydig细胞的分离方法及其用途，所述方法包括：a.将用胶原酶消化的睾丸组织通过孔径为20-100μm的滤网过滤，得到睾丸间质组织内细胞；b.将获得的睾丸间质组织内细胞在培养液中培养10分钟-4.5小时，取贴壁细胞得到Leydig细胞，但得到细胞中仍含较多管周肌样细胞。

受限于无法在体外有效分离Leydig细胞和睾丸管周肌样细胞，Leydig细胞和睾丸管周肌样细胞的相关研究进展缓慢。

近年来，有报道指出神经生长因子受体(Nerve Growth Factor Receptor，NGFR)可以作为分选Leydig细胞的标志物，然而，申请人近期通过单细胞测序和免疫组化发现，虽然生殖细胞、支持细胞和免疫细胞等不表达NGFR，但是管周肌样细胞同样表达NGFR蛋白，这些结果提示该方法不能成功分离较纯净的Leydig细胞和管周肌样细胞。

综上所述，如何提供一种有效分离方法，分别得到高纯度的Leydig细胞和高纯度的管周肌样细胞，便于进行细胞功能、病理等研究，是Leydig细胞和睾丸管周肌样细胞研究领域亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种睾丸管周肌样细胞的生物标志物及其应用，所述生物标志物可作为鉴定睾丸管周肌样细胞的标志物，从而能够有效区分睾丸管周肌样细胞和Leydig细胞，分离得到高纯度的Leydig细胞和高纯度的管周肌样细胞。

为达上述目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种睾丸管周肌样细胞的生物标志物，所述生物标志物包括ITGA9蛋白。

本发明中，深入分析睾丸管周肌样细胞和Leydig细胞的基因表达谱，发现睾丸管周肌样细胞特异表达ITGA9蛋白，而Leydig细胞不表达该蛋白，基于ITGA9蛋白，能够有效区分睾丸管周肌样细胞和Leydig细胞，从而解决了常规分步消化、差异贴壁和梯度离心等方法难以将两者分离的问题。

优选地，所述ITGA9蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列。

SEQ ID NO.1：