[发明专利]一种双菌菌剂及在荒漠化土壤修复的应用

权利要求书

1.一种荒漠化土壤修复方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：将双菌菌剂与待修复土壤混合静置，得到第一混合土壤；

S2：向第一混合土壤中加入固定液，混合后得到第二混合土壤；

S3：向第二混合土壤中加入胶结液，混合后得到第三混合土壤；

S4：将步骤S1-S3重复进行1-5次，得到修复后土壤；

所述双菌菌剂为将碳酸盐矿化菌和产碳酸酐酶菌分别发酵得到菌液，然后将菌液混合均匀获得，所述双菌菌剂中碳酸盐矿化菌和产碳酸酐酶菌的活菌比为1-5：1；

所述碳酸盐矿化菌为巴斯德芽孢杆菌，来源为美国菌种保藏中心，编号ATCC 11859；

所述产碳酸酐酶菌为工程菌E-22b-IRLS；

步骤S2中所述固定液为氯化钙溶液，浓度为0.01M～0.05M；

步骤S3中所述胶结液为氯化钙和尿素的混合溶液，所述氯化钙和尿素的摩尔浓度相同，为0.5M～1.5M；

步骤S1中，所述双菌菌剂和待修复土壤的体积比为1-1.5:1，静置时间为2-5h；

步骤S2中，所述固定液和待修复土壤的体积比为0.1-0.3:1；

步骤S3中，所述胶结液和待修复土壤的体积比为5-10:1。

2.根据权利要求1所述的土壤修复方法，其特征在于，所述碳酸盐矿化菌的培养方法为，挑取碳酸盐矿化菌单菌落至第一培养基，置于25-35℃200-250rpm条件下过夜培养活化菌体，得到过夜培养物；吸取过夜培养物加入其体积100-200倍的第一培养基中，再于25-35℃200-250rpm下培养24h，得到碳酸盐矿化菌菌液。

3.根据权利要求2所述的土壤修复方法，其特征在于，所述产碳酸酐酶菌的培养方法为，挑取产碳酸酐酶菌单菌落至第二培养基，置于25-35℃200-250rpm条件下过夜培养活化菌体，得到过夜培养物；吸取过夜培养物加入其体积100-200倍的第二培养基中，再于25-35℃200-250rpm下培养24h，得到产碳酸酐酶菌菌液。

4.根据权利要求3所述的土壤修复方法，其特征在于，所述第一培养基每升含酵母提取物20g、硫酸铵10g、Tris 15.748g，用稀盐酸调整pH至9；

所述第二培养基每升含蛋白胨10g、酵母粉5g、氯化钠10g。

5.根据权利要求4所述的土壤修复方法，其特征在于，使用第一培养基将碳酸盐矿化菌菌液稀释至OD₆₀₀＝1，使用第二培养基将产碳酸酐酶菌菌液稀释至OD₆₀₀＝1，然后将碳酸盐矿化菌菌液和产碳酸酐酶菌菌液的按体积比为1-5：1混合均匀。