[发明专利]一种液体活检样本的处理方法及其应用

说明书

本发明涉及质谱法、光谱法测定用液体活检样本中蛋白、多肽以及代谢产物的前处理方法。

技术领域

本发明涉及液体活检样本的处理方法，具体而言涉及不同分子量的疾病检测用液体活检样本的处理方法。

背景技术

随着体外诊断技术(intro diagnostic)技术应用的普及，用于体外诊断的生物样本的预处理工艺也越来越受到关注。以往，在液体活检样本中存在大量的盐类及基因碎片，对仪器检测产生严重的干扰。因此，降低生物样本中的干扰，提高检测精度，在当前生物检测领域备受瞩目。而且，当前使用的疾病筛查手段中使用的样本处理，往往精度比较低，漏检率较高，这也让很多患者失去早期治疗的机会，从而降低了患者的生存率。例如血液代表了一种方便的临床分析诊断样本。血清代谢物和肽有可能作为从正常状态到疾病状态进展的可靠指标。然而，血清中盐、脂质和高浓度蛋白质的存在会对仪器分析产生不利影响，因为所有这些部分都会干扰仪器对生物诊断标志物的检测。

本发明在实验过程中，已评估、优化和标准化许多处理步骤，通过对少量血清等液体活检样本进行特定的前处理，便会得到消除干扰物质，富集和纯化多肽、代谢产物等目标物质的目的，更加适用于高通量和临床环境，从而更适用于精确的疾病筛查。

现有技术文献

非专利文献

Machine learning of serum metabolic patterns encodes early-stage lungadenocarcinoma，Lin Huang et.，NATURE COMMUNICATIONS(2020)11：3556

发明内容

发明要解决的技术问题

在液体活检样本中存在大量的盐类及基因碎片，对仪器检测产生严重的干扰。本方法通过使用填料为色谱吸附剂的过滤装置，对样本中的干扰物质进行过滤，对待检测物质进行富集再分离，后续通过检测仪器对洗脱液进行检测，可以筛查出包括肿瘤、冠心病、高血压等慢性疾病。

解决问题的手段

为了解决上述问题，本发明提供一种光谱法、质谱法测定液体活检样本中蛋白、多肽以及代谢产物的前处理方法，建立一种准确性良好的、样品消耗量低的、高通量检测的一种的非侵袭性诊断疾病的方法，大大降低了样本中干扰物质的浓度，提高了诊断的准确率。

具体而言，本发明包含以下实施方式。

1、一种样本处理方法，其包括下述步骤：

步骤一：将样本与酸化试剂混合，进行酸化；

步骤二：使过滤装置的过滤头润湿；

步骤三：使步骤二的过滤装置的过滤头吸附步骤一的酸化样本；

步骤四：使用冲洗液冲洗步骤三的过滤装置的过滤头；

步骤五：使用步骤四的过滤装置的过滤头吸取洗脱液；

步骤六：收集洗脱液。

2、根据1所述的样本处理方法，其特征在于，所述过滤装置选自固相萃取柱无筛板固相萃取柱、层析柱、微量层析柱、针头过滤器。

3、根据2所述的样本处理方法，其特征在于，所述过滤装置中的填料选自C18十八烷基硅胶、C8辛烷基硅烷键合硅胶、C4硅胶键合丁基、C6H5苯基硅烷键合硅胶、CN硅胶键合氰基、NH2硅胶键合氨基以及OH硅胶键合二醇基中的一种。

4、根据1～3中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的样本选自血清、尿液、组织液中的任意一种。

5、根据1～4中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂选自卤代有机酸溶液。