[发明专利]一种诱导铁甲草茎段外植体不定芽再生的方法

权利要求书

1.一种诱导铁甲草茎段外植体不定芽再生的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.取铁甲草种子，进行催芽处理和消毒处理，然后接种于MS固体培养基上进行种子无菌萌发培养；所述的MS固体培养基，由MS培养基、蔗糖30g/L和琼脂8g/L组成，

pH 5.8-6.0；

b.取生长了15-25天的铁甲草无菌植株，将根部和叶部都去除，保留茎；将茎切成小段，

作为茎段外植体；

c.将茎段外植体轴向水平接种至不定芽诱导培养基，诱导培养不定芽；所述的不定芽诱导培养基，为如下(1)-(3)中的任意一种：

(1)由MS培养基、TDZ 0.5mg/L、KT 2mg/L、硝普纳1.2mg/L、CuCl₂ 0.3mg/L、蔗糖30g/L和琼脂8g/L组成，pH 5.8-6.0；

(2)由MS培养基、TDZ 0.5mg/L、KT 2mg/L、硝普纳1.2mg/L、MgSO₄·7H₂O 0.5mg/L、蔗糖30g/L和琼脂8g/L组成，pH 5.8-6.0；

(3)由MS培养基、TDZ 0.5mg/L、KT 2mg/L、硝普纳1.2mg/L、AgCl 0.3mg/L、蔗糖30g/L和琼脂8g/L组成，pH 5.8-6.0；

d.将长度大于1cm的不定芽接种至生根培养基，诱导生根，获得铁甲草再生植株；所述的生根培养基，由MS培养基、IBA 0.1mg/L、DA-6 0.6mg/L、蔗糖30g/L和琼脂8g/L组成，pH5.8-6.0。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤a的催芽处理为：用80℃的水对种子恒温浸泡处理10min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤a的消毒处理为：用体积分数75％的乙醇水溶液消毒30-45s，然后用质量分数2.5％的NaClO水溶液消毒10-15min，期间不断振荡，灭菌水冲洗3-4次，每次1min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤b的将茎切成小段是将茎切成0.5cm长小段。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的诱导铁甲草茎段外植体不定芽再生的方法的培养条件为：光照强度2000lx，光照时间12小时/天，温度25±1℃。