[发明专利]一种用于石蜡组织切片脱蜡修复阻断的复合液配制方法

说明书

本发明涉及一种用于石蜡组织切片脱蜡修复阻断的复合液配制方法，可用于石蜡组织切片等在加热的条件下脱蜡、抗原修复及内源性过氧化物酶阻断，经处理后的组织切片马上就可以进行免疫组织化学染色。本发明的复合液在72‑75℃温育条件下，脱蜡效果与二甲苯的脱蜡效果相同，无毒性、不挥发、无味，为环保型的温育水性脱蜡剂；在95‑100℃加热条件下，一次性完成脱蜡的同时进行抗原修复的作用，同时完成内源性过氧化物酶的阻断作用，热处理后的石蜡组织切片漂洗后即可进行免疫组织化学的染色。脱蜡、抗原修复及阻断一次性完成，具有方法简便、实验操作时间短、不易掉片、环保无毒等优点。

技术领域

本发明涉及病理免疫组化石蜡切片预处理，属病理检测试剂技术领域，尤其涉及一种用于石蜡组织切片脱蜡修复阻断的复合液配制方法。

背景技术

免疫组化（IHC）是目前病理诊断过程中不可或缺的重要技术手段，是肿瘤确诊、分型鉴定、指导用药、预后评价及疗效评估等方面起到了不可估量的作用。病理石蜡组织切片是免疫组化（IHC）最常用的也是最主要的检测样本。由于该样本为石蜡包埋的组织切片，非水溶性的，不能直接用于免疫组化检测，在免疫组化检测前需要对样本进行预处理，即需要脱蜡、水化、抗原修复及内源性过氧化物酶阻断的处理。经典的石蜡组织切片预处理基本步骤为：二甲苯（或环保脱蜡剂）脱蜡、乙醇梯度水化（如无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、蒸馏水）、抗原修复、漂洗、阻断、再漂洗。经过一系列操作过程处理后，方可进行石蜡切片的免疫组化的染色反应。

经典的石蜡组织切片脱蜡、水化、修复及阻断，不仅操作步骤复杂，而且脱蜡往往需要使用二甲苯，二甲苯具有一定的毒性，环境不友好，对操作者也会带来一定的伤害。替代经典的脱蜡、水化、修复及阻断的是技术发展的必然趋势。

发明内容

本发明涉及一种用于石蜡组织切片脱蜡修复阻断的复合液（高pH）配制及其应用，可用于石蜡组织切片等在加热的条件下脱蜡、抗原修复及内源性过氧化物酶阻断，经处理后的组织切片马上就可以进行免疫组织化学染色。本复合液组分包括：水性溶蜡剂、组织渗透剂、分散剂、消泡剂、组织保护剂、阻断剂及高pH值修复液（含有Triton X-100、EDTA、Tris等）等。本发明的复合液在72-75℃温育条件下，脱蜡效果与二甲苯的脱蜡效果相同，无毒性、不挥发、无味，为环保型的温育水性脱蜡剂；在95-100℃加热条件下，一次性完成脱蜡、抗原修复作用的同时，还能达到内源性过氧化物酶的阻断效果，热处理后的石蜡组织切片漂洗后即可进行免疫组织化学的染色。脱蜡、抗原修复及阻断一次性完成，具有方法简便、实验操作时间短、不易掉片、环保无毒等优点。

本发明提出了一种用于石蜡组织切片脱蜡修复阻断的复合液配制及其应用，为了实现本发明的目的，通过脱蜡修复阻断复合液的配制，然后进行了脱蜡、脱蜡修复及脱蜡修复阻断的三级技术验证。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种用于石蜡组织切片脱蜡修复阻断的复合液配制方法，包括以下步骤：

S1：制备水性脱蜡剂；

S2：制备修复液；

S3：制备内源性过氧化物酶阻断剂；

S4：配置复合液。

优选的，所述S1中，所述水性脱蜡剂由水溶性脱蜡剂、组织渗透剂、分散剂、消泡剂和蒸馏水混合制备而成。

优选的，所述水溶性脱蜡剂由0.25-2.5%的PEG200、0.05-0.75%的乙二醇、0.25-1.00%的四氢化呋喃-2-甲醇和0.05-0.85%的脂肪醇聚氧乙烯醚混合组成；本发明利用PEG200、乙二醇、四氢化呋喃-2-甲醇、脂肪醇聚氧乙烯醚等组成的混合物，在水相中具有良好的溶解性，在加热的情况下可以溶解石蜡；所述组织渗透剂由0.1-0.75%的Triton X-100和0.01-0.5%的丙三醇混合组成；本发明使用Triton X-100、丙三醇，可以两种或至少一种的化合物。