[发明专利]基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法

说明书

本发明公开了一种基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法，包括如下步骤：S1、使用消化酶对目标蛋白进行酶切反应，得到蛋白的酶切片段；S2、以步骤S1中得到的蛋白的酶切片段作为检测样本，候选抗体作为一抗，进行Western Blot检测，获得蛋白酶切片段的肽谱识别特征指纹；S3、找出步骤S2中得到的蛋白酶切片段的肽谱识别特征指纹图谱中具有差异的泳道，所述泳道对应的候选抗体即为可能存在两两配对的配对抗体。本发明所述的抗体配对筛选方法能快速进行初步筛选出识别不同表位的抗体，可有效缩小候选抗体数量，进而减少ELISA配对工作量，具有操作简单、成本低廉等优点，因此，在配对抗体筛选领域具有良好的应用情景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法。

背景技术

配对抗体是指能同时结合在一个抗原分子上的两个抗体。通常情况下，一个抗原分子拥有多个抗原决定簇，将抗原注射入动物体内进行免疫，针对不同的抗原决定簇会产生不同的抗体。产生的抗体具有特异性与专一性，即一个抗体分子只会特异性地结合一个抗原决定簇。两个针对不同抗原决定簇的抗体，有可能同时结合到抗原分子上。如果两个抗体同时结合到同一个抗原分子上，那么这两个抗体就是配对抗体。

配对抗体目前主要运用于ELISA试剂盒的制作，配对抗体筛选的方法有双抗体夹心ELISA法、双抗体夹心胶体金免疫层析法等等。目前，最常用的配对抗体筛选的方法为双抗夹心ELISA法，其具体操作步骤是将两种可能配对的抗体，一种作为捕获抗体，另一种作为检测抗体；首先将捕获抗体包被在酶标板上，后加入抗原，再加入检测抗体，若能得到阳性信号并且与抗原含量正相关，说明捕获抗体和检测抗体能同时与抗原特异性结合，该捕获抗体与检测抗体为一对配对抗体。该方法能准确筛选用于双抗体夹心ELISA法的配对抗体，但其具有复杂的酶标、包被和加样过程，操作步骤繁琐，反应时间长，通常只能用穷举法测试任意两个候选抗体的组合，当候选抗体数量较多时工作量极大。

有鉴于此，有必要开发一种基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法，减少工作量，节省成本。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法。解决现有的基于ELISA法进行配对抗体筛选时，具有复杂的酶标、包被和加样过程，操作步骤繁琐，反应时间长，通常只能用穷举法测试任意两个候选抗体的组合，当候选抗体数量较多时工作量极大等问题。

为解决现有技术中的上述问题，本发明是通过如下技术方案来实现的：

一种基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法，包括如下步骤：

S1、使用消化酶对目标蛋白进行酶切反应，得到蛋白的酶切片段；

S2、以步骤S1中得到的蛋白的酶切片段作为检测样本，候选抗体作为一抗，进行Western Blot检测，获得蛋白酶切片段的肽谱识别特征指纹；

S3、找出步骤S2中得到的蛋白酶切片段的肽谱识别特征指纹图谱中具有差异的泳道，所述泳道对应的候选抗体即为可能存在两两配对的配对抗体。

进一步地，所述基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法还包括采用双抗体夹心ELISA法对步骤S3中得到的可能存在两两配对的配对抗体进行确认复核的步骤。

进一步地，步骤S1中，所述消化酶选自胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或胃蛋白酶中的一种。

进一步地，步骤S1中，所述消化酶的浓度为0.2～0.5%，所述酶切反应的温度为25～40℃，酶切反应的时间为0.5～8h。

进一步地，步骤S1中，所述酶切反应体系中的缓冲液为Tris-HCl缓冲液，pH为8.0。