[发明专利]生物样品中外泌体分离方法、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种生物样品中外泌体分离试剂盒，其特征在于，包括：所述平衡缓冲液、洗涤液和洗脱液，所述平衡缓冲液中含有基础缓冲液和高价阳离子，所述高价阳离子选自Ca²⁺、Mg²⁺、Fe³⁺、Fe²⁺、Al³⁺、Mn²⁺、Cu²⁺和Zn²⁺中的任意一种或多种。本发明还公开了一种使用该生物样品中外泌体分离试剂盒进行外泌体分离的方法。本发明还公开了所述生物样品中外泌体分离试剂盒在诊断或区分前列腺疾病、前列腺癌术后评估、前列腺癌预后评估中收集外泌体的应用和制备以外泌体为功能成分的治疗药物中等的应用。本发明还公开了诊断前列腺疾病的试剂盒和前列腺疾病分型试剂盒。

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，具体涉及一种生物样品中外泌体分离方法、试剂盒及其应用。

背景技术

前列腺是男性生殖系统附属腺体中最大的腺体，在泌尿系统和生殖系统中均发挥重要作用。前列腺疾病主要包括前列腺炎、前列腺增生和前列腺癌，是成年男性泌尿生殖系统常见病，严重影响男性的健康状况和生活质量，已成为新的严重公共卫生问题之一。

目前对前列腺疾病的发病机制、病理生理学改变还不十分明确。在临床诊断、治疗方法及疗效评价等诸多方面尚无明确标准可依。直肠超声(TRUS)、前列腺特异抗原(PSA)、直肠指检(DRE)和穿刺活检是临床早期诊断前列腺疾病的常用手段，但这些方法要么存在侵入性患者可接受度低，要么存在滞后性或准确度低等问题，临床亟待一种快速、有效的检测方法，并能实时准确反映疾病进展状态。在精准医学时代，液态活检以其取样简单、可重复性、无放射性及创伤性等优势，适合应用于疾病的早期筛查与早期诊断。目前研究的比较多的液态活检领域包括循环肿瘤细胞(CTC)、循环肿瘤DNA(ctDNA)、小分子RNA(micro RNA，miRNA)和外泌体(exosome)“三驾马车”。其中，外泌体(exosome)，是活细胞分泌的大小为30-120nm的微小囊泡，广泛存在于唾液、血液、尿液和母乳等生物体液中，与多种疾病的发生、发展有相关性。其包含多种活性分子，如蛋白质、脂肪和核酸(mRNA、miRNA及其它非编码RNA)等，能作为信号分子传递给靶细胞，从而介导细胞间的物质传递与信息交流。

外泌体的特性：1)传递作用，携带相关分子(如RNA)信号，并具有传递、运输和调节作用；2)保护作用，具有生化稳定性，易于生化分子长期保存。这些优势，使外泌体在疾病诊断领域有显著的优势，为前列腺疾病的无创诊断提供了新的方向。

目前，市场上出现通过检测尿液中PCA3(前列腺癌抗原3)、PSA、ERG及SPDEF等基因的含量，判定是否患有前列腺癌。但存在一些缺陷和不足：1)受尿液个体差异影响较大，结果准确率较低，检出率低复检率较高；2)多个RNA靶标联合检测，增加了成本和操作复杂性；3)只针对前列腺癌和非癌进行区分，对于区分正常和前列腺炎/增生/癌的临床效果没有有效评价。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种生物样品中外泌体分离方法、试剂盒及其应用，其采用优化体系的阴离子交换层析柱法对生物样品中外泌体提取，可得到高得率和高纯度的外泌体，基于该外泌体进一步检测可用于检测前列腺癌等相关疾病，方法简便，检测准确性和区分度高。

本发明的第一目的在于提供一种生物样品中外泌体分离试剂盒，包括：所述平衡缓冲液、洗涤液和洗脱液，所述平衡缓冲液中含有基础缓冲液和高价阳离子，所述高价阳离子选自Ca²⁺、Mg²⁺、Fe³⁺、Fe²⁺、Al³⁺、Mn²⁺、Cu²⁺和Zn²⁺中的任意一种或多种。

在一些实施方式中，所述试剂盒还包括分子凝胶排阻和阴离子交换复合层析色谱柱及其相关使用试剂，所述分子凝胶排阻和阴离子交换复合层析色谱柱中具有多孔结构填料，所述填料的孔结构的内表面修饰有正电荷。