[发明专利]一种B淋巴细胞发育亚群免疫分型的方法和试剂盒

说明书

本发明涉及免疫学技术领域，尤其涉及一种B淋巴细胞发育亚群免疫分型的方法和试剂盒。该方法包括：取不同的荧光标记的抗体，与待检测样品混合，孵育后，经流式细胞术检测，得检测数据；所述抗体包括：抗CD19的抗体、抗CD10的抗体、抗IgD的抗体、抗CD27的抗体、抗CD38的抗体。本发明提供的分型方法实现了对B淋巴细胞发育亚群进行更加全面的免疫分型，所需待测样品少，操作简单、所需时间短、准确性高、可广泛应用于B淋巴细胞发育亚群的免疫分型。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种B淋巴细胞发育亚群免疫分型的方法和试剂盒。

背景技术

B淋巴细胞，简称B细胞，是由哺乳动物骨髓或鸟类法氏囊中的淋巴样前体细胞分化成熟而来。成熟B细胞主要定居于淋巴结皮质浅层的淋巴小结和脾脏红髓及白髓的淋巴小结内。在外周血中，B细胞约占淋巴细胞总数的20％左右。B细胞是体内产生抗体的细胞，并具有抗原提呈功能。B细胞及其产生的抗体是体液免疫的核心要素，作为适应性免疫系统的一部分，可以保护人体抵抗几乎无限多种病原体。B细胞的发育、选择和功能缺陷导致自身免疫、恶性肿瘤、免疫缺陷和过敏性疾病。

根据B细胞不同的细胞表面标志，可以将B细胞分为不同的发育亚群。人B细胞的最初发育发生在骨髓中，包括将祖细胞发育为前B细胞和前B细胞群体。离开骨髓后，过渡性B细胞在外周血淋巴器官中进一步发育，并作为初始B细胞在血液中循环。初始B细胞遇到抗原，在生发中心和淋巴器官边缘区通过T依赖和独立的途径受到刺激，形成记忆B细胞、浆母细胞和长寿浆细胞。

血清免疫球蛋白水平被广泛认为是健康供体和不同免疫相关疾病患者中最可靠的B细胞功能替代标志物。而B细胞发育对理解B细胞定向治疗的潜在机制及其对B细胞自身抗体产生和其他功能的影响非常重要。除了治疗血液系统恶性肿瘤如非霍奇金淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病外，B细胞定向疗法在自身免疫性疾病的治疗中也发挥着重要作用。最近在类风湿关节炎和系统性红斑狼疮患者中进行的临床研究表明，利用利妥昔单抗治疗记忆细胞的损耗是有疗效的，但是记忆B细胞并不是消耗抗体的唯一目标，因此，这些干预措施可能会调节其他具有治疗相关性的B细胞群(Joshua A.Boyce et.al..B cell–directedtherapies for autoimmune disease and correlates of disease response andrelapse.J ALLERGY CLIN IMMUNOL,2008,121:13-21.)。因此，对B细胞亚群的研究更为迫切。

血液样本中的B淋巴细胞与机体的免疫系统密切相关，利用外周血检测B细胞总数和B细胞组成的变化更为动态。B细胞具有独特的分化抗原，常用流式细胞术分析外周血CD19检测总B细胞，但是，没有对B细胞的发育情况进行进一步检测。B细胞表面有多种受体，如膜表面免疫球蛋白，大多采用间接荧光免疫法或酶免疫组织化学法检测未成熟的幼稚B细胞和成熟B细胞。不管是利用流式细胞术检测总B细胞，还是利用间接荧光免疫法或酶免疫组织化学法，这些方法对B细胞的检测面窄，操作复杂，样品需要量大，耗时也比较长。如果要对B细胞发育进行更加精细的免疫分型，需要采用更为简单、省时和样品量需求小的方法和定量分析。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种B淋巴细胞发育亚群免疫分型的方法和试剂盒，该方法可实现B淋巴细胞更全面、精细地免疫分型和定量分析，效率高，且节约了待测样品的用量，用时短，更适合B淋巴细胞发育亚群的分型和定量分析。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种B淋巴细胞发育亚群免疫分型的方法，包括：

取不同荧光标记的抗体，与待检测样品混合，孵育后，经流式细胞术检测，得检测数据，根据检测数据判定细胞型别；

所述抗体包括：

抗CD19的抗体、抗CD10的抗体、抗IgD的抗体、抗CD27的抗体和抗CD38的抗体；