[发明专利]快速检测肝素的试剂及检测方法

说明书

一种快速检测肝素的试剂及检测方法，将色酮基引入到氨基化石墨烯量子点上，制备了一种色酮基席夫碱，利用色酮基席夫碱醇水溶液与一定量的米托蒽醌或阿霉素混合，合成了一种色酮基席夫碱/米托蒽醌或阿霉素复合物，该复合物合成简单，又具有对肝素的选择性。采用此复合物使用荧光法可以实现快速检测水中肝素，方便易行，灵敏度高，可以在常温水溶液环境中快速检测肝素，该方法工艺简单、操作方便；具有实用性强及广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及识别结合和用于光学检测肝素的分子检测技术领域，具体涉及一种快速检测肝素的试剂及检测方法。

背景技术

肝素属于生物相关的粘多糖，在调节血液凝固、细胞生长和免疫反应中起着关键作用 (Soc. Rev. 2013, 42, 9184−9195; Angew. Chem., Int. Ed. 2002, 41, 390−412; Carbohydrate biosensors. Chem. Rev. 2004, 104, 5987−6016; Nat. Prod.Rep. 2002, 19, 312−331)。它可以通过静电相互作用与抗凝血酶、成纤维细胞生长因子、细胞外超氧化物歧化酶、脂蛋白等多种蛋白质相互作用，从而调节不同的功能生理和病理过程，如细胞生长分化、炎症、凝血、脂质转运和代谢等 (Angew. Chem. Int. Ed., 2002,41, 390)。此外，肝素作为为数不多的碳水化合物药物之一，已被临床用作抗凝剂。然而，肝素过量会导致出血和肝素诱导的血小板减少。 因此，在肝素抗凝治疗中，监测人体内的肝素水平是非常重要的。此外，通过排泄，这些药物可以到达地下水，并可能对微生物种群产生毒性影响，进而造成公共健康危害。因此，迫切需要开发一种简便的检测生物液体中肝素的方法。

用于肝素检测的传统方法包括高效液相色谱法(HPLC)、质谱法(MS)、核磁、比色法、荧光等方法( Chem. Commun., 2017,53, 1486-1489; Sensors Actuators: B.Chemical 301 (2019) 127089; Polymer 53 (2012) 490–494; Anal. Chem. 86 (2014)6580–6586; ChemBioChem 8 (2007) 391–394 )。荧光法是一种易操作、低成本、灵敏度高、样品无需复杂预处理的方法。

发明内容

为了解决现有技术存在的技术缺陷，本发明提供了一种快速检测肝素的试剂及检测方法，将色酮基引入到氨基化石墨烯量子点上，制备了一种色酮基席夫碱，利用色酮基席夫碱醇水溶液与一定量的米托蒽醌或阿霉素混合，合成了一种色酮基席夫碱/米托蒽醌或阿霉素复合物，该复合物合成简单，又具有对肝素的选择性。采用此复合物使用荧光法可以实现快速检测水中肝素，方便易行，灵敏度高。

本发明采用的技术解决方案是：一种快速检测肝素的试剂，所述的试剂包括色酮基席夫碱/米托蒽醌复合物或的色酮基席夫碱/阿霉素复合物溶液，所述的色酮基席夫碱/米托蒽醌复合物或的色酮基席夫碱/阿霉素复合物通过以下步骤制备：首先将浓度为0.1mg/mL-20 mg/mL的石墨烯量子点水溶液置于三颈瓶中，溶液匀速搅拌，加入一定量的催化剂后逐滴加入色酮基化合物的醇溶液，在45-80℃加热2h-24h，制得产物用分子量为1000Da的透析袋于醇水混合溶液中透析三天，得到色酮基席夫碱,将色酮基席夫碱与米托蒽醌或阿霉素混合，得到所述的色酮基席夫碱/米托蒽醌复合物或的色酮基席夫碱/阿霉素复合物。

所述的石墨烯量子点为氨基化石墨烯量子点。

所述的醇溶液为甲醇或乙醇。

所述的催化剂为三乙胺或冰醋酸。

所述的醇水溶剂中水和醇的体积比在10:1-1:10。

所述的醇水溶剂体积与催化剂的体积比为1:1-100:1。

所述的氨基化石墨烯量子点与色酮基化合物的质量比为5:1-1:5。