[发明专利]一种钙离子通道阻断药物的检测方法

说明书

本发明涉及一种钙离子通道阻断药物的检测方法，包括步骤：S1、Neuro‑2a使用高糖HDMEM培养基在六孔板中培养24小时，设立空白、损伤、加药组；S2、倒掉培养基，加入含GV‑58的培养基处理三小时，激活钙离子通道，细胞内钙离子浓度上升，建立损伤模型；S3、再加入不同浓度的ω‑芋螺毒素GVIA阻断钙离子通道使细胞内钙离子浓度下降；S4、钙离子荧光探针，处理一小时，PBS冲洗，胰蛋白酶消化2分钟，收集离心，使用荧光分光光度计检测480nm激发波长下的发射波长，与空白组比较，计算相对细胞内钙离子浓度。本发明能够快速简易地对细胞内相对钙离子浓度进行检测，对钙离子通道阻断药物进行快速评价。

技术领域

本发明涉及钙离子浓度的检测方法，特别涉及一种钙离子通道阻断药物的检测方法。

背景技术

活体细胞不停地进行新陈代谢活动，就必须不断地与周围环境进行物质交换，而细胞膜上的离子通道就是这种物质交换的重要途径。人们已经知道，大多数对生命具有重要意义的物质都是水溶性的，如各种离子，糖类等，它们需要进入细胞，而生命活动中产生的水溶性废物也要离开细胞，它们出入的通道就是细胞膜上的离子通道。

离子通道由细胞产生的特殊蛋白质构成，它们聚集起来并镶嵌在细胞膜上，中间形成水分子占据的孔隙，这些孔隙就是水溶性物质快速进出细胞的通道。离子通道的活性，就是细胞通过离子通道的开放和关闭调节相应物质进出细胞速度的能力，对实现细胞各种功能具有重要意义。

钙离子是最广泛存在的细胞内信使,调控着几乎所有生命过程.最近的结构生物学研究解析了很多不同种类的钙离子通道在不同开放-关闭状态下的近原子分辨率结构。有关进展揭示了这些通道的分子组成、动态活动、生理功能、调控修饰的分子基础,为阐明钙信号转导和相关疾病的微观机制提供了理论基础。

因此对钙离子通道阻断剂的作用，在钙离子浓度层面进行检测评价，对于药物研发、机制探索、公共卫生事业具有重要的意义。

发明内容

针对上述背景中的问题，本发明提供了一种钙离子通道阻断药物的检测方法，其方法简单，结果准确。

一种钙离子通道阻断药物的检测方法，包括以下步骤：

S1、Neuro-2a使用高糖HDMEM培养基在六孔板中培养24小时，设立空白、损伤、加药组；

S2、倒掉HDMEM培养基，加入含GV-58的培养基处理三小时，激活钙离子通道，细胞内钙离子浓度上升，建立损伤模型；

S3、再加入不同浓度的ω-芋螺毒素GVIA阻断钙离子通道使细胞内钙离子浓度下降；

S4、钙离子荧光探针，处理一小时，PBS冲洗，胰蛋白酶消化2分钟，收集离心，使用荧光分光光度计检测480nm激发波长下的发射波长，与空白组比较，计算相对细胞内钙离子浓度。

本发明的有益效果为：

本发明能够快速简易地对细胞内相对钙离子浓度进行检测，对钙离子通道阻断药物进行快速评价。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应该被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为Neuro-2a细胞内相对钙离子浓度柱状图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不视为限定本发明的范围，实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。