[发明专利]一种肾形虫种株长期保种及快速复苏的方法

权利要求书

1.一种肾形虫虫株长期保种方法，其他在于，包括：

(1)肾形虫的培养，挑取单个细胞进行单克隆培养，培养至对数生长期进行保种；

(2)选取0.22μm微孔滤膜作为保种介质；

(3)将0.22μm微孔滤膜置于过滤器上，将一定体积的虫液缓缓倾倒在过滤器上，待过滤完成后，取下滤膜，待干后，置于容器中保存。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)包括：可于有机质含量丰富的土壤中采集土样，利用“非淹没培养法”孵化土壤中的肾形虫，96小时后在体式显微镜下利用微吸管挑取肾形虫单个细胞。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)包括：挑取单个细胞后，在24孔板中每孔添加1ml蒸馏水和一颗麦粒，于20～25℃的恒温恒湿培养箱中建立单克隆培养系，72小时后将24孔板各孔的同种肾形虫混合转移至六孔板，每孔倒入10ml蒸馏水并加两颗灭菌后的麦粒，20～25℃的恒温恒湿培养箱中进行大量纯培养72小时，取对数生长期的虫体培养液进行保种。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)包括：将0.22μm微孔滤膜进行裁剪至和过滤装置的型号匹配的尺寸，后将0.22μm滤膜置于超净工作台中进行紫外灭菌20min后再进行保种。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)包括：所述微孔滤膜为0.22μm的混合纤维素(MCE)微孔滤膜。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)包括：取下滤膜，室温条件自然风干后，将滤膜折叠好置于离心管中，室温条件保存。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)包括：将0.22μm微孔滤膜置于过滤器上，将体积为10ml的虫液缓缓倾倒在过滤器上，待过滤完成后，用镊子取下微孔滤膜，室温条件下自然风干1小时，将风干后的滤膜折叠好置于15ml离心管中，室温条件保存。

8.一种肾形虫虫株快速复苏方法，其特征在于，将通过权利要求1-7任一方法保护的肾形虫虫株，进一步通过步骤(4)复苏，步骤(4)包括：在肾形虫种株复苏时，吸取10ml蒸馏水于六孔板中并加入2颗灭菌后的麦粒，将附着虫体的微孔滤膜置于六孔板中，20-25℃恒温恒湿培养箱中培养96小时，镜检观察。

9.根据权利要求8所述的一种肾形虫虫株快速复苏方法，其特征在于，吸取10ml蒸馏水于六孔板中并加入2颗灭菌后的麦粒，将附着虫体的微孔滤膜置于六孔板中，20-25℃恒温恒湿培养箱中培养24小时，镜检观察虫体生长状态，继续培养至72小时肾形虫达到最大种群密度。