[发明专利]一种液质联用测定血浆中西格列汀浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液质联用测定血浆中西格列汀浓度的方法，包括血浆样品预处理和试样测定：以K₂EDTA为抗凝剂，以西格列汀‑d4为内标；在96孔板的孔中加入50μL样品，加入内标西格列汀‑d4工作溶液，混匀后加入甲醇，封板，混匀，样品在4℃离心10；取离心后上清液100μL至另一96孔收集板中，加入300μL 50％甲醇，混匀；样品在4℃，离心，获得测试样品；然后取1μL测试样品注入高效液相色谱串联质谱仪中，检测样品中的西格列汀和内标西格列汀‑d4的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的西格列汀浓度；本发明的检测方法，以西格列汀‑d4为内标，加入沉淀剂进行蛋白沉淀，取上清液加稀释剂，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测，检测速度快，精度高，灵敏度优。

技术领域

本发明属于医药技术领域，更具体的说涉及一种液质联用测定血浆中西格列汀浓度的方法。

背景技术

西格列汀(Sitagliptin,SGT)是一种二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂，在2型糖尿病患者中可通过增加活性肠促胰岛激素的水平而改善血糖控制。肠促胰岛激素包括胰高糖素样多肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽(GIP)，由肠道全天释放，并且在进餐后水平升高。西格列汀能够防止DPP-4水解肠促胰岛激素，从而增加活性形式的GLP-1和GIP的血浆浓度。通过增加活性肠促胰岛激素水平，西格列汀能够以葡萄糖依赖的方式增加胰岛素释放并降低胰高糖素水平。对于存在高血糖症的2型糖尿病患者，胰岛素和胰高糖素水平发生的上述变化可降低糖化血红蛋白A1c(HbA1c)并降低空腹血糖和餐血糖水平。

目前现有技术检测人血浆中的西格列汀的分析方法参差不齐，多采用非同位素内标，无法保证待测物与内标洗脱方式的一致性。为满足临床生物样品分析的需求，需开发更简单、可靠、省时的人血浆中西格列汀浓度测定的方法，本专利建立了检测血浆西格列汀浓度的高效液相质谱法，专属性高、操作简单、成本低廉，特别适合大批量样品的自动化检测工作。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中西格列汀浓度的方法，以西格列汀-d4为内标，加入沉淀剂进行蛋白沉淀，取上清液加稀释剂，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测，检测速度快，精度高，灵敏度好。

本发明技术方案一种液质联用测定血浆中西格列汀浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)血浆样品预处理：

以K₂EDTA为抗凝剂，以西格列汀-d4为内标；在96孔板的孔中加入50μL样品，加入50μL浓度为100.000ng/mL的内标西格列汀-d4工作溶液，混匀后每一个样品孔中加入300μL甲醇，封板，混匀10min，样品在4℃，2623g离心10min；取离心后上清液100μL至另一96孔收集板中，加入300μL 50％甲醇，封板，混匀；样品在4℃，2623g离心10min，获得测试样品；

(2)试样测定：

取1μL测试样品注入高效液相色谱串联质谱仪中，检测样品中的西格列汀和内标西格列汀-d4的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的西格列汀浓度；

液相色谱条件为：

色谱柱：Welch Ultimate XB-C₁₈，柱规格为2.1×100mm，5μm；色谱柱温：40℃；流动相A：水/甲酸的体积百分比为100/0.1；流动相B：甲醇；强洗液：水/甲醇/甲酸的体积百分比为20/80/0.1；柱塞清洗液：水/甲醇体积百分比为90/10；自动进样器温度为4℃；梯度洗脱，流速为0.5mL/min，进样量为1μL，分析时间4min；西格列汀和西格列汀-d4预期保留时间约在1.55min；

质谱条件为：