[发明专利]一种液质联用测定血浆中奥硝唑浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液质联用测定血浆中奥硝唑浓度的方法，以EDTA‑K₂为抗凝剂，以奥硝唑‑d5为内标；在96孔板的孔中加入50μL待测血浆样品；然后加入50μL浓度为1.000μg/mL的内标奥硝唑‑d5工作溶液；混匀后每一个样品孔中加入300μL甲醇，封板，混匀，离心；取离心后上清液50μL至另一96孔收集板中，每一个样品孔中加入200μL 50％甲醇，封板，混匀，离心，得测试样品；取1μL测试样品注入高效液相色谱串联质谱仪中，检测测试样品中的奥硝唑和内标奥硝唑‑d5的色谱峰，并据此计算待测血浆样品中的奥硝唑浓度；本发明的LC‑MS/MS检测方法，以奥硝唑‑d5为内标，加入沉淀剂进行蛋白沉淀，取上清液加稀释剂，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测，获得人血浆中奥硝唑浓度。

技术领域

本发明属于医药技术领域，更具体的说和涉及一种液质联用测定血浆中奥硝 唑浓度的方法。

背景技术

奥硝唑(Ornidazole,ORZ)又名α氯甲基-2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇，为口 服的抗厌氧菌和抗原虫药，疗效好、毒副作用低，对毛滴虫、阿米巴原虫、贾第 虫、厌氧菌感染有良好疗效，优于甲硝唑，略优于替硝唑。临床上多用于厌氧菌 或原虫引起的感染性疾病。主要用于预防术后厌氧菌感染，治疗敏感厌氧菌引起 的感染，如败血症、脑膜炎、腹膜炎、术后伤口感染、产后脓毒症、脓毒性流产 和子宫内膜炎。口服该药2小时内血药浓度达峰值，消除半衰期约为14小时， 血浆蛋白结合率小于15％。广泛分布于人体组织和体液中，包括脑脊髓液。奥 硝唑在肝中代谢，在尿中主要以轭合物和代谢物排谢，少量在粪便中排泄。已报 道单剂量口服于5天中消除量为85％，尿中63％，粪便中22％。胆汁排泄在奥 硝唑及其代谢物的消除中约占4.1％。

目前现有技术检测人血浆中的奥硝唑的分析方法不多，多采用非同位素内 标，无法保证待测物与内标洗脱方式的一致性。为满足临床生物样品分析的需求， 需开发更简单、可靠、省时的人血浆中奥硝唑浓度测定的方法，本专利建立了检 测血浆奥硝唑浓度的高效液相质谱法，专属性高、操作简单、成本低廉，特别适 合大批量样品的自动化检测工作。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中奥硝唑浓度的方法，以奥硝 唑-d5为内标，加入沉淀剂进行蛋白沉淀，取上清液加稀释剂，预处理后，经色 谱柱分离，用质谱检测器检测，获得人血浆中奥硝唑浓度，本方法获得的血浆标 准曲线线性范围为50.000ng/mL～20000.000ng/mL，批内和批间精密度CV％均 小于±15％。

本发明技术方案一种液质联用测定血浆中奥硝唑浓度的方法，包括以下步 骤：

(1)待测血浆样品预处理：

在室温黄光条件下，以EDTA-K₂为抗凝剂，以奥硝唑-d5为内标；在96孔 板的孔中加入50μL待测血浆样品；然后加入50μL浓度为1.000μg/mL的内标奥 硝唑-d5工作溶液；混匀后每一个样品孔中加入300μL甲醇，封板，混匀10min， 样品在4℃，2623g离心10min；

取离心后上清液50μL至另一96孔收集板中，每一个样品孔中加入200μL 50％甲醇，封板，混匀；样品在4℃，2623g离心10min，得测试样品；

(2)试样测定：

在室温黄光条件下，取1μL测试样品注入高效液相色谱串联质谱仪中，检 测测试样品中的奥硝唑和内标奥硝唑-d5的色谱峰，并据此计算待测血浆样品中 的奥硝唑浓度；采用内标法，以奥硝唑和内标奥硝唑-d5的峰面积比值带入标准 曲线方程计算待测血浆样品中的奥硝唑的浓度。

优选地，所述高效液相色谱串联质谱仪的液相色谱条件为：