[发明专利]一种烟草内源抗烟草花叶病毒提取物及其制备方法和应用

说明书

本发明公开一种烟草内源抗烟草花叶病毒提取物及其制备方法和应用，包括：步骤1，提取：取晾干的烟草根茎粉碎，多次浸煮后蒸馏得到浸膏；步骤2，纯化：将所得浸膏依次经过浓缩、上色谱柱、洗脱、蒸馏得到浓缩液；步骤3，干燥：将浓缩液干燥并粉碎过100目筛后收集分装。本发明采用烟田废弃物，经溶剂提取、色谱分离的方法形成烟草内源抗病毒组份规模化生产工艺和质量控制方法，并对其使用方法和范围进行了明确，为利用进一步系统研究烟草内源抗烟草病毒病提供物质基础和科学依据，开创了一种田间病毒病防治新渠道，有效保证了烟草内源抗烟草花叶病毒组份制备过程的有序性和连贯性的同时也有效祛除了烟碱对目标产物的干扰，方法简单，可操作性强。

技术领域

本发明涉及一种烟草内源抗烟草花叶病毒提取物及其制备方法和应用，主 要是用于田间烟草花叶病毒防治，属于烟草病毒控制技术领域。

背景技术

烟草病毒病是全世界烟草栽培区发生最普遍、危害最严重、防治最困难的 病害，又称烟草癌症，严重危害了烟叶的产量和质量，给烟农造成了巨大的经 济损失。

由于植物病毒对寄主细胞具有绝对寄生性，病毒传播方式具有多样性，而 植物缺乏完整的免疫系统，因而高效抗病毒剂的开发存在极大困难，至今尚未 有理想的防治药剂。目前，采用的农业防治措施存在较大的局限性，化学防治 则易引发环保问题。

因此，急需进行抗TMV天然产物的研究与开发是解决上述技术问题的关键 所在。

发明内容

针对上述背景技术中存在的诸多缺陷与不足，本发明对此进行了改进和创 新，目的在于提供一种对烟草花叶病毒具有较好防效的烟草内源提取物。

本发明另一个发明目的是提供一种该提取物规模化制备方法，该方法采用 密度控制的方法对浓缩物进行质量控制，有效保证了烟草内源抗烟草花叶病毒 组份制备过程的有序性和连贯性。

本发明的还一个发明目的在于提供利用烟田废弃物的提取物在防治作物病 毒病上的用途。有效祛除了烟碱对目标产物的干扰，方法简单，可操作性强， 为利用进一步系统研究烟草内源抗烟草病毒病提供物质基础和科学依据，开创 了一种田间病毒病防治新渠道。

为解决上述问题并达到上述的发明目的，本发明烟草内源抗烟草花叶病毒 组份制备方法和应用是通过采用下列的设计结构以及采用下列的技术方案来实 现的：

一种烟草内源抗烟草花叶病毒提取物的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

步骤1，提取：取晾干的烟草根茎粉碎，多次浸煮后蒸馏得到浸膏；

步骤2，纯化：将所得浸膏依次经过浓缩、洗脱、蒸馏得到浓缩液；

步骤3，干燥：将浓缩液干燥并粉碎过100目筛后收集分装。

优选的，所述步骤1中的浸煮方式为：先用20倍重量的70％甲醇-0.025 mol/L盐酸溶液浸泡10h，再40℃煎煮，提取2次得到提取液，每次200min， 提取液减压蒸馏至20℃时，密度为1.05～1.10g/cm³为止，得到浸膏。

优选的，所述步骤2中的纯化方式为：将所得浸膏以2mL/min*柱直径(cm) /1.5的流速上样至6倍量浓缩液重量的大孔吸附树脂D-101柱，纯水冲洗2BV，然 后3BV30％乙醇溶液以2mL/min*柱直径(cm)/1.5的流速冲洗杂质；步骤2中的洗 脱式为：以3.4BV的80％乙醇2mL/min*柱直径(cm)/1.5的流速洗脱得到洗脱液。

优选的，所述步骤3中的浓缩式为：把洗脱液减压蒸馏至相对密度达1.10～1.105g/cm³，温度达20℃时，得到浓缩液。

优选的，所述步骤3中的干燥式为：设定进风温度为170℃～190℃,出风温 度为90℃～92℃，离心喷雾干燥。