[发明专利]一种涎液化糖链抗原KL-6的检测试剂及检测方法

说明书

本发明公开了一种涎液化糖链抗原KL‑6的检测试剂及检测方法，包括R1缓冲液、R2试剂和不同浓度kl‑6抗原标准品，R2试剂的配置方法，包括以下步骤：(1)胶乳颗粒清洗；(2)苯乙烯胶乳颗粒活化；(3)抗体标记偶联；(4)封闭；(5)保存。根据不同浓度kl‑6标准品的检测结果△A，绘制标准曲线，然后对样本进行检测，得到样本的△A，将样本的△A对比标准曲线，得到样本中涎液化糖链抗原KL‑6的浓度。实现了一工艺简单，操作简便、检测速度快、精密度和重复性都可以和进口试剂盒相媲美的胶乳免疫比浊法测定KL‑6的试剂及检测方法。

技术领域

本发明属于生化检测的技术领域，特别是涉及一种涎液化糖链抗原 KL-6的检测试剂及检测方法。

背景技术

KL-6(涎液化糖链抗原)是日本人Kohno于1985年发现的一种跨膜高分 子量黏蛋白，含有分子量约为200KD的唾液酸化糖链，该糖链主要是由 20个氨基酸残基组成的串联重复序列，具有被特异性抗体识别的空间结构 表位。在正常肺组织中，主要表达于型肺泡细胞和支气管上皮细胞的细胞 质和胞膜，部分表达于细支气管基底细胞和Clara细胞的细胞质及支气管腺 体，胰腺、胃及乳腺等器官组织的上皮细胞亦有部分表达。在日本和国内开展的多项对KL-6的研究显示，其作为间质性肺疾病(ILD)的血清学指 标显示出积极的临床意义，可用于间质行肺炎包括药物引导的间质性肺炎、 及胶原蛋白失调诱导的间质性肺炎等的诊断和确定治疗策略，用于诊断具 有肺癌、胰腺癌等的患者。

科研上kl-6的常见检测方法主要有ELISA，荧光免疫层析、化学发光、 胶乳免疫增强比浊法，ELSA虽然是一种可靠的方法，但其操作及时效性不 能满足临床大量样本的检测，临床上国内现有两家KL-6试剂盒，均为磁微 粒化学发光法，不仅成本高，操作复杂，且需要重新配置专用化学发光的 检测仪，相对而言，胶乳增强免疫比浊法为最为常见的生化分析法，生化 仪在医院和检验机构的普及率高，操作相对简便，且灵敏度和线性范围都 在需求范围内，是KL-6批量检测的首选。但是国内尚未有该方法学的KL-6 检测产品注册。

目前广泛使用的胶乳免疫比浊法制备试剂的方法主要有两种，一种是 将两株抗体按照一定比例混合，然后一起进行微球标记，因为不同抗体需 要的标记条件不一样，所以这种方法的精确度和精密度均不高，且抗体利 用率低，而另外一种方法就是将两株单抗分别偶联在不同粒径的胶乳微球 上，再按照一定比例混匀，这就涉及到多次的离心的超声和重悬操作，工 艺过于复杂，不利于放大生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种涎液化糖链抗原KL-6的检测试剂及检测方 法，解决现有检测工艺和步骤过于复杂，不利于放大生产的问题。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

一种涎液化糖链抗原KL-6的检测试剂，包括R1缓冲液、R2试剂和不 同浓度kl-6抗原标准品，kl-6抗原标准品浓度为0、250、500、1000、2500、 5000U/mL；

所述R1缓冲液配方如下：

调节PH至7.0±0.05，定容至1L容量瓶，用0.22μm滤膜过滤，置于2-8℃保存；

所述R2试剂的配置方法，包括以下步骤：

(1)胶乳颗粒清洗；量取固含为10％的苯乙烯胶乳颗粒0.5ml加至 3.0ml的清洗缓冲液中，离心，20000转/分钟，30分钟，去上清，用3.0ml 活化缓冲液对胶乳微粒沉淀物重悬超声；

(2)苯乙烯胶乳颗粒活化：加入活化剂对到上述清洗好的胶乳微粒中， 混匀，对胶乳微粒进行活化，37度活化0.5小时；

(3)抗体标记偶联：将抗人KL-6抗体加入到活化好的苯乙烯胶乳颗 粒溶液中，37℃摇床混匀2-4h；