[发明专利]一种青贮饲料黄曲霉素检测试剂盒及检测方法

说明书

本申请提供了一种青贮饲料黄曲霉素检测试剂盒以及相应的检测方法。本申请的试剂盒和方法中使用1:1:1或3:3:1的乙腈：水：乙醚混合液作为提取溶剂提取青贮饲料中黄曲霉毒素B1，相比现有的甲醇水溶液有效提高了提取效率和提取稳定性，有效节约的检测的人力、时间和试剂成本。

技术领域

本申请属于食品、饲料安全检测领域，具体地，本申请提供了一种青贮饲料黄曲霉素检测试剂盒以及相应的检测方法。

背景技术

青贮是指在密封条件下，通过青贮原料上附着的乳酸菌等厌氧发酵将碳水化合物转化成以乳酸为主的有机酸，使pH下降，抑制有害菌的生长，从而使饲料得以长期保存并优化其营养价值的过程。自古以来青贮就是寒冷地区畜牧业饲料的主要来源之一，可以青贮的饲料主要有玉米、苜蓿、大麦、燕麦、高粱、紫云英、甜菜、马铃薯等，种植广泛、产量大、操作便利的玉米为我国北方主要饲料青贮品种。

感官质量、pH、有机酸含量、蛋白含量、各种纤维含量等指标外，青贮饲料还需要关注黄曲霉毒素这一重要安全指标，黄曲霉速度是青贮饲料发酵过程中的必然产物（现有方法均无法完全抑制产黄曲霉的微生物生长），虽然反刍动物自身受黄曲霉毒素影响不大，但该毒素一方面会影响反刍动物消化功能，另一方面可能导致后续的肉、奶产品中的黄曲霉毒素超标。在目前食品安全日益受重视，标准不断提高的大背景在，黄曲霉毒素的准确检测显得愈发重要。

食品、饲料行业实际操作中最常用的黄曲霉毒素检测手段是ELISA试剂盒，其操作方便，不需要复杂仪器；需要更精密、严谨的检测时则可以采用液相色谱乃至质谱手段。无论哪种方法，样品的前处理/黄曲霉毒素的提取都是准确检测的基础，对于大多数食品、农产品样品，甲醇、乙腈、三氯甲烷等溶剂提取即可达到80%以上的提取率（GB17480-2008、GB30955-2014中推荐体积比1:1或8:2的甲醇水溶液）和很好的准确性。

发明内容

我们在青贮饲料黄曲霉毒素检测实践中发现现有提取/检测方法中的存在一个严重问题，对于青贮饲料这样成分复杂、异质性强的样品（全株玉米的不同部位经过数种微生物长时间发酵），现有甲醇水溶液或者氯仿溶液对于某些样品经常会发生提取率波动大（反映为检测数值差异明显，甚至会达到40%以上）和提取率低的情况。排除检测设备问题后，我们认为该问题可能与青贮饲料中的某些脂的存在有关，虽然玉米青贮饲料中粗脂肪含量一般仅有3%左右（按GB17480-2008的标准远不需要特殊处理），但这些脂的存在形式，如包裹状态可能对黄曲霉毒素的释放/溶解过程有影响。

针对上述问题，我们尝试了多种提取方法和溶剂，发现将适量一般认为不适合提取黄曲霉毒素B1的乙醚（AFB1基本不溶于乙醚）加入提取溶剂后能有效改善提取效果，不仅使提取率提高，更增加了提取率的稳定性。

一方面，本申请提供了一种青贮饲料黄曲霉毒素检测试剂盒，其特征在于，其包含有乙腈、水、乙醚中的两种以上成分组成的提取溶剂。

进一步地，所述黄曲霉毒素为黄曲霉毒素B1，，所述青贮饲料为全株玉米青贮饲料。

进一步地，所述试剂盒中还包含ELISA或液相检测用试剂。

进一步地，所述提取溶剂由乙腈、水、乙醚组成。

进一步地，所述提取溶剂中乙腈：水：乙醚体积比例为1:1:1或3:3:1。

进一步地，所述提取溶剂中乙腈：水：乙醚体积比例为3:3:1。

另一方面，本申请提供了一种检测青贮饲料黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，所述方法中使用上述试剂盒。

进一步地，所述方法中使用上述试剂盒中的提取溶剂提取样本中的黄曲霉毒素B1。

进一步地，所述方法中还包括ELISA或液相检测步骤。