[发明专利]一种养殖刺参用抑制致病弧菌的复合微生态制剂

权利要求书

1.一种养殖刺参用抑制致病弧菌的复合微生态制剂，其特征在于是由沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonas palustris）、丁酸梭菌（Clostridium butyricum）、柞树叶提取物及芦荟叶提取物混合为饲料添加剂，每克饲料中的添加量为沼泽红假单胞菌10⁶ cfu、丁酸梭菌10⁶ cfu、柞树叶提取物1.5mg、芦荟叶提取物6mg；所述柞树叶提取物和芦荟叶提取物按照如下方法制备：分别将柞树叶与芦荟叶用蒸馏水清洗干净，25℃通风阴干；用匀浆机分别将柞树叶与芦荟叶匀浆粉碎，加入体积分数为65~85%的乙醇溶液，料液比为0.05~0.1 g/mL；在工作频率为40 KHZ，功率为80W的超声波作用下常温浸提1~2.5 h；将浸提液装入超滤膜装置内，在0.06Mpa压力条件下过滤去掉杂质，经减压浓缩、冷冻干燥得到冻干粉，即柞树叶提取物和芦荟叶提取物；所述沼泽红假单胞菌种购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CICC23812，所述丁酸梭菌种来自中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CICC23847。

2.根据权利要求1所述的养殖刺参用抑制致病弧菌的复合微生态制剂，其特征在于所述沼泽红假单胞菌按照如下步骤制备而成：

步骤1：将0.1 g活菌数为0.5×10¹⁰~10¹⁰ cfu/g的沼泽红假单胞菌冻干粉菌剂溶解于1ml无菌蒸馏水中，将菌种在固体培养基上划线活化，所述固体培养基组分为胰蛋白胨15.0g/L，大豆胨5.0 g/L，氯化钠5.0 g/L及琼脂20 g/L，pH7.5~8.0；在光照度为2000~3000lux，温度为30~35 ℃的条件下于厌氧培养箱中培养至平板出现红色单菌落；

步骤2：挑取红色单菌落接种于沼泽红假单胞菌液体培养基中，培养温度为30~35 ℃，光照强度为2000~3000 lux，于厌氧培养箱中静置培养3~5天，所述液体培养基组分为胰蛋白胨15.0 g/L，大豆胨5.0 g/L及氯化钠5.0 g/L， pH7.5~8.0；

步骤3：于6000 rpm离心10 min，收集菌体，用无菌海水重悬菌体。

3. 根据权利要求2所述的养殖刺参用抑制致病弧菌的复合微生态制剂，其特征在于所述固体培养基和液体培养基中还添加有如下组分：氯化镁0.1~0.3 g/L，硫酸亚铁2~5 mg/L，硫酸锌0.5~1.5 mg/L，氯化锰0.1~0.3 mg/L，氯化镍1~4 mg/L及吲哚乙酸0.3~0.8 mg/L。

4.根据权利要求3所述的养殖刺参用抑制致病弧菌的复合微生态制剂，其特征在于所述丁酸梭菌按照如下步骤制备而成：

步骤1：将0.1 g活菌数为0.5×10¹⁰~10¹⁰ cfu/g的丁酸梭菌冻干粉菌剂充分溶解于1 ml无菌蒸馏水中，将菌种在强化梭菌琼脂培养基上划线活化，厌氧培养箱37 ℃培养至平板出现圆形单菌落；所述强化梭菌琼脂培养基组分为蛋白胨10 g/L，牛肉粉10 g/L，酵母粉3 g/L，葡萄糖5 g/L，可溶性淀粉1 g/L，氯化钠5 g/L，醋酸钠3 g/L，半胱氨酸盐酸盐0.5 g/L，硫酸锰 0.15 g/L，磷酸氢二钾1.5 g/L，0.25 g/L氯化钙，硫酸镁 0.65 g/L及琼脂15 g/L，pH6.8~7.2；

步骤2：挑取单菌落，接种于强化梭菌液体培养基中，静置于厌氧培养箱中37 ℃厌氧培养1~2天 ；所述强化梭菌液体培养基组分为蛋白胨10 g/L，牛肉粉10 g/L，酵母粉3 g/L，葡萄糖5 g/L，可溶性淀粉1 g/L，氯化钠5 g/L，醋酸钠3 g/L，半胱氨酸盐酸盐0.5 g/L，硫酸锰 0.15 g/L，磷酸氢二钾1.5 g/L，0.25 g/L氯化钙及硫酸镁 0.65 g/L，pH6.8~7.2；

步骤3：于6000 rpm离心10 min，收集菌体，用无菌海水重悬菌体。