[发明专利]一种抑制沙门氏菌外排泵的抗生素佐剂及类似物的应用

说明书

本发明属于兽药制备与应用领域，具体涉及一种抑制沙门氏菌外排泵的抗生素佐剂及类似物的应用。利用分子对接方法将AcrB蛋白与潜在候选药物对接，以多潘立酮为最佳候选外排泵抑制剂，通过棋盘法确认多潘立酮增强恩诺沙星抗耐药沙门氏菌和耐药大肠杆菌的抗菌活性的及最佳比例；通过AcrAB‑TolC泵的阳性抑制剂确认了多潘立酮对沙门氏菌AcrAB‑TolC泵的抑制活性。并进一步确证了多潘立酮在抑制沙门氏菌生物膜形成和抑制沙门氏菌多宿主致病力中的作用。本发明证明了多潘立酮与抗菌药物联用时不仅可有效逆转耐药沙门氏菌和大肠杆菌的耐药性，且在抑制生物膜形成和致病力方面有显著的效果。

技术领域

本发明属于兽药制备和应用领域，具体涉及一种抑制沙门氏菌外排泵的抗生素佐剂及类似物的应用。

背景技术

包括沙门氏菌和大肠杆菌在内的肠杆菌科病原菌沙门氏菌对人类健康造成了严重威胁，并在畜禽养殖中造成了巨大的经济损失。据估计，肠炎沙门氏菌(S.enterica)每年会导致1600 万至3300万的感染病例，全世界每年约有50万至60万人死于沙门氏菌感染(Bula Rudas et al., 2015)。更令人担忧的是沙门氏菌和大肠杆菌的耐药性日益增强。根据Zeng等人(2019)的报道，从我国不同省份的672个样本中分离出的92株沙门氏菌对至少一种抗菌剂具有耐药性。Browne等人 (2020)指出，从1990年至2018年报告的12万株沙门氏菌菌株(94616株鼠伤寒沙门氏菌和 29731株副伤寒沙门氏菌)对所有抗菌药物的耐药性都有所恶化。面对沙门氏菌的造成的巨大健康威胁和严重耐药情况，世界卫生组织(WHO)在2017年将沙门氏菌列入了急需新抗生素的优先名单(WHO，2018)。

然而，事实上，在过去二十年中，只有两种具有新抗菌机制的药物--恶唑烷酮和脂肽进入了临床(Fernandes et al.,2017)。正如Fernandes等人(2017)提出的，全新抗生素的发展前景并不乐观，因为它们的利润远低于慢性病处方药，而且鉴于细菌耐药性日益严重，新批准的抗生素通常由监管机构作为储备药物而不是上市销售。因此，出于经济原因，大型制药公司没有动力投入财力和物力开发全新的抗生素(Lamut et al.,2019)

本领域公知，外排泵蛋白的过度表达与某些细菌的耐药性有关，如肠杆菌科类(沙门氏菌、大肠杆菌和空肠弯曲菌)，铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌等。这提示我们外排泵抑制剂 (EPI)可用于增加抗生素的活性并延长其使用寿命(Lamut et al.,2019)。大量文献表明， AcrAB-TolC是介导沙门氏菌和大肠杆菌耐药的主要外排泵(Lamut et al.,2019)，生物膜的形成是沙门氏菌和大肠杆菌的另一耐受机制(Lamut et al.,2019)。Baugh等人(2014)指出，一旦沙门氏菌的AcrAB-tolC泵功能丢失，其生物膜形成将受到抑制。此外，Wang-Kan等人 (2017)证明，失去acrB基因和AcrB泵失活都会导致沙门氏菌的毒力降低。因此可见，EPI 在逆转耐药性、抑制生物膜形成和降低沙门氏菌毒力方面均具有巨大潜力。

正如β-内酰胺酶抑制剂(如舒巴坦)和磺胺类增效剂(如甲氧苄啶类)可增强抗生素的抗菌效果一样。由于EPI可抑制细菌外排泵的活性，从而减少外排泵对抗生素的外排作用，其与抗生素联用时可使得进入菌体的抗生素增加，以达到逆转耐药性和预防细菌耐药性产生的作用。但是由于EPI起效时所需浓度的毒性作用、不良的药代动力学特性或低的体内疗效，几十年来，只有少数EPI达到了临床试验的水平(Puzari et al.,2017；Schillaciet al.,2017)。如果从全新分子的角度进行筛选EPI，新分子的毒性和体内动力学也仍是不确定的。