[发明专利]一种沼液中多种类兽药残留的同时检测方法

说明书

本发明属于环境检测技术领域，公开了一种沼液中多种类兽药残留的同时检测方法，包括样品前处理、混合标准溶液配制及样品检测。本发明基于LC‑MS/MS，通过优化样品前处理和实验仪器参数，建立了检测方法。通过特定的样品前处理，本发明方法具有操作简便、净化效果强、基质效应低等优势；本发明中所有检测项目在线性范围内的相关系数r²均大于0.99，具有良好的线性关系，具有高灵敏性的优势；并且根据不同化合物的极性差别，通过分组采用正负离子扫描模式，可一次性实现17大类79种兽药的同时分析，具有高通量的优势；本发明提供的检测方法为人体健康监督管理提供了技术保障。

技术领域

本发明属于环境检测技术领域，具体涉及一种沼液中多种类兽药残留的同时检测方法。

背景技术

以人类或禽畜粪便、农作物秸秆、树木残枝枯叶和餐厨垃圾为原料的厌氧发酵产沼气工艺给我国农村人民的生活带来了极大的便利和清洁的能源。随着沼气工程的建设和推广，对生产残留物——沼液进行合理的应用是农村生态化和可持续发展的必然要求。一方面，沼液富含有机质，具有突出的肥效和杀菌作用，已被广泛使用在浸种、施肥及喂食禽畜和水产品以提高产能和经济效益。但另一方面，沼液的成分复杂、品质不一，其中残留的多种类兽药有可能随着使用过程对农作物、禽畜和水产品造成二次污染，进而影响食品安全和人群健康。因此，有必要对沼液中多种类兽药进行测定，为人体健康监督管理提供技术保障。

然而，目前国内外对沼液中兽药残留的研究较少，检测手段相对匮乏。已有的研究多侧重于养殖废水、禽畜粪便基底或者沼液中单一种类兽药的检测，如利用高效液相紫外可见检测器或者LC-MS/MS对沼液中磺胺或者四环素进行检测等，目前，关于沼液中多种类兽药的同时测定方法尚未见报道。这是由于沼液样品基质复杂，并且不同种类兽药的理化性质各异，从而难以实现多种类兽药残留的同时提取、净化和检测。

综上，如何建立一种样品前处理简单、高效快速、可同时检测多种类兽药残留的检测方法是目前国内外研究的热点和难点。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中无法同时检测沼液中多种类兽药残留的缺陷，而提供一种沼液中多种类兽药残留的同时检测方法，该方法样品前处理简单、灵敏度高、稳定性好，可以同时实现共17大类79种兽药残留的检测。

具体地，本发明提供了一种沼液中多种类兽药残留的同时检测方法，所述多种类兽药包括磺胺类、喹诺酮类、β-受体激动剂、大环内酯类、四环素类、β-内酰胺类、工业染料类、雄激素类、硝基呋喃及其代谢物类、雌激素类、氯霉素类、乙胺嘧啶、喹乙醇、卡巴氧、螺旋霉素、玉米赤酶醇和尼卡巴嗪共17类79种兽药；该检测方法包括以下步骤：

(1)样品前处理

将HLB柱依次用甲醇和超纯水进行活化，得到活性HLB柱；将新鲜沼液高速离心后用0.1～0.3μm水系滤膜过滤，之后将所得澄清沼液采用超纯水稀释，得到稀释沼液样品；于稀释沼液样品中加入Na₂EDTA后摇匀，以4～6mL/min的流速通过活性HLB柱进行上样；上样结束后用甲醇-水进行淋洗，淋洗结束并抽干后依次用甲醇、甲醇-二氯甲烷进行洗脱；将所得洗脱液在35～45℃下氮吹至干后进行定容，最后经0.1～0.3μm有机滤膜过滤得到待测样品溶液，待LC-MS/MS检测；其中，所述活性HLB柱中填料干重和柱内体积与新鲜沼液的比例为(0.5～1)g:(6～20)mL:2mL，所述稀释沼液样品的稀释比例为100～200倍；

(2)混合标准溶液配制

将17类79种兽药标准品配制成0.02～500μg/L系列梯度的混合标准溶液，-25℃～-18℃下避光保存；

将10种替代物标准品混合配制成1mg/mL的混合标准溶液，-25℃～-18℃下避光保存；

(3)样品检测