[发明专利]重组酶酯Est1260在降解尼泊金酯上的应用

说明书

本发明适用于酶工程技术领域，提供了重组酶酯Est1260在降解尼泊金酯上的应用，所述重组酯酶Est1260由酯酶基因est1260重组表达得到，所述重组酶酯Est1260的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示，本发明将酯酶基因est1260序列进行异源表达，通过对阳性克隆子的诱导表达得到重组酶酯，通过测定其应用时发现重组酯酶对尼泊金酯包括MeP、EtP、PrP、BuP有强降解作用。因此在去除尼泊金酯残留方面有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于酶工程技术领域，尤其涉及重组酶酯Est1260在降解尼泊金酯上的应用。

背景技术

尼泊金酯是一类以烷基取代基从甲基到丁基或苄基的对羟基苯甲酸酯，包括尼泊金甲酯(MeP)、尼泊金乙酯(EtP)、尼泊金丙酯(PrP)、尼泊金丁酯(BuP)。主要用作有机合成、食品、化妆品、医药的杀菌防腐剂，也用作于饲料防腐剂，是国际上公认的广谱性高效食品防腐剂。但是其作为一种环境内分泌干扰物对生态环境和人类健康所产生的不利影响越来越受到关注。因此，在自然分解能力无法满足人类安全需求的形势下，寻找高效降解尼泊金酯的新方法，降低尼泊金酯的毒负作用已成为一个重要研究领域。

生物法尤其是生物酶在处理尼泊金酯残留问题上具有处理简便、安全高效、应用范围广且无二次污染等优点，日益受到重视。因此，急需一种具有优良性能的生物催化剂尼泊金酯降解酶。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供重组酶酯Est1260在降解尼泊金酯上的应用，旨在解决上述背景技术中提出的问题。

本发明实施例是这样实现的，重组酶酯Est1260在降解尼泊金酯上的应用，所述重组酯酶Est1260由酯酶基因est1260重组表达得到，所述重组酶酯Est1260的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。

作为本发明实施例的一个优选方案，所述酶酯基因est1260的核苷酸序列为SEQID NO.1所示。

作为本发明实施例的一个优选方案，所述重组酶酯Est1260的制备方法包括以下步骤：

用酶酯基因est1260构建的重组载体转化宿主细胞，得到重组菌；

经IPTG诱导，得到重组酯酶Est1260。

作为本发明实施例的一个优选方案，所述重组载体为pET-32a(+)。

作为本发明实施例的一个优选方案，所述宿主细胞为大肠杆菌E.coli BL21(DE3)。

作为本发明实施例的一个优选方案，所述IPTG终浓度为10-1000μM，诱导温度为16～30℃。

作为本发明实施例的一个优选方案，所述尼泊金酯为MeP、EtP、PrP或BuP。

作为本发明实施例的一个优选方案，所述降解温度为0-40℃；降解时的pH为6.47-9.18。

本发明将酯酶基因est1260序列进行异源表达，通过对阳性克隆子的诱导表达得到重组酶酯，通过测定其应用时发现重组酯酶对尼泊金酯包括MeP、EtP、PrP、BuP有强降解作用。因此在去除尼泊金酯残留方面有广阔的应用前景。

附图说明

图1为重组酶酯对底物MeP、EtP、PrP、BuP降解液相色谱图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

以下结合具体实施例对本发明的具体实现进行详细描述。

实施例

1、基因片段的克隆