[发明专利]一种外电场抑制人乳腺癌细胞的方法及干扰仪

权利要求书

1.一种外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，其特征在于，所述方法的步骤包括：

细胞复苏：将冻存的人乳腺癌细胞解冻后制得细胞悬液，再放置于细胞培养箱中培养；

细胞传代及冻存：取生长状态良好的人乳腺癌细胞进行传代培养；选择生长状态良好的处于对数生长期的人乳腺癌细胞进行细胞冻存以保存细胞系；

细胞铺板及电场抑制：取生长状态良好、处于对数期的人乳腺癌细胞接种于培养板中，将培养板外加预设的频率为145-155kHz、强度为2V/cm的电场，放置于细胞培养箱中进行培养；

抑制效果检测：采用噻唑蓝染色法或结晶紫染色法检测细胞抑制效果。

2.如权利要求1所述的外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，其特征在于，所述细胞铺板及电场抑制步骤中的电场是频率为150kHz的交变电场。

3.如权利要求1所述的外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，其特征在于，所述细胞复苏的操作步骤为：

解冻：是将冻存的人乳腺癌细胞从液氮中取出，并迅速置于预先打开的37℃水浴锅中，并不断摇晃冻存管，使细胞冻存液迅速融化；

离心：再将解冻后的人乳腺癌细胞冻存管用酒精消毒后迅速转移到超净台中，并将细胞悬液加入到盛有6ml 10％FBS的RPMI 1640或DMEM-Basic培养基的15ml离心管中，用吸管轻轻吹打使之混合均匀；然后将离心管放入离心机，配平后以室温1000rpm的转速离心3-4分钟；

制细胞悬液：取出离心管消毒后，放入超净台后用吸管吸取去除上清液，再用吸管吸取3ml细胞培养液反复轻轻吹打离心管中细胞成细胞悬液；

细胞培养：将细胞悬液转移至10cm直径的细胞培养皿中，并补充6ml含有10％FBS的完全培养液，将培养皿置于37℃、CO₂浓度为5％的细胞培养箱中培养。

4.如权利要求1所述的外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，其特征在于，所述细胞传代及冻存中，细胞传代的步骤为：

培养：先用酒精将倒置显微镜擦拭干净，然后将从细胞培养箱取出的细胞置于倒置显微镜下进行观察，待生长状态良好的细胞生长至占比75-85％时，进行细胞的传代处理；

传代处理：将要传代的细胞置于超净台中，用吸管吸去旧培养液，沿细胞培养皿的侧壁轻轻加入3ml生理盐水，轻微上下颠倒培养皿使其充分冲洗残留的细胞培养液，然后用吸管将生理盐水吸出；再向培养皿中滴加1-2滴胰酶，上下颠倒培养皿，使胰酶充分覆盖细胞表面；在倒置显微镜下观察细胞的状态，当细胞间隙增大时，及时加入适量含有10％FBS的培养液终止消化过程；然后用吸管轻轻反复吹打细胞，使细胞吹打成细胞悬液，然后用吸管将细胞悬液吸入15ml离心管内，室温1000rpm条件下离心4分钟；取出离心管，弃去上清液，加入适量细胞培养液，轻轻吹打混合均匀；然后将其吹打均匀的细胞悬液转移至3个盛有6ml含10％FBS细胞培养液的培养皿中，继续置于37℃、CO₂浓度为5％细胞培养箱中培养，完成细胞传代；

细胞冻存的操作为：将上步细胞传代处理中离心后的离心管中，弃去上清液，加入适量的细胞冻存液，用吸管轻轻吹打混合均匀，并将其转移至细胞冻存管中，每支细胞冻存管加入1.5ml细胞悬液，用记号笔标记细胞名称，冻存日期信息；将细胞冻存管先放入细胞冻存盒，再将其置入-80℃冰箱，隔天将细胞冻存管置入液氮中长期保存。

5.如权利要求1所述的外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，其特征在于，所述细胞铺板及电场抑制步骤的操作为：

取生长状态良好，处于对数期的人乳腺癌细胞细胞，用胰酶消化后，进行细胞计数后接种于细胞96孔培养板中，每个孔的细胞接种量控制在4000-5000个，每个孔加入细胞培养液200μl，每个孔设置3到5个孔作为复孔；然后将实验组96孔培养板置于预设参数的电场中，再将实验组和对照组细胞的96孔培养板统一置于37℃、CO₂浓度为5％细胞培养箱中进行培养。